沉默lncRNA-MALAT1对胶质瘤血管生成拟态的影响

摘要

目的 探讨沉默长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(Metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)对胶质瘤血管生成拟态的影响。方法 实时荧光定量(qPCR)法检测人胶质瘤细胞U251、U87和正常人星形胶质细胞NHA中lncRNA-MALAT1的表达量。京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体论(GO)分析lncRNA-MALAT1的信号通路及生物学功能。qPCR法检测沉默效率，将沉默效率最高的片段序列作为实验组(LV-MALAT1组),携带无意义片段的重组慢病毒感染人胶质瘤细胞U251、U87作为阴性对照组(LV-NC组),未干预的人胶质瘤细胞U251、U87作为空白对照组(BLANK组),并检测分析3组中lncRNA-MALAT1的表达量。细胞三维培养法观察分析U251、U87细胞的体外血管生成拟态(Vasculogenic mimicry, VM)形成能力。CCK-8实验和划痕实验评估细胞的增殖和迁移能力。Transwell实验观察细胞的迁移和侵袭能力。Western-blot检测VM相关蛋白VE-cadherin、MMP2、VEGF以及PI3K/AKT/FOXO1信号转导通路蛋白及其磷酸化蛋白表达量。结果 与NHA细胞比较，lncRNA-MALAT1在胶质瘤细胞U251、U87中高表达(P<0.000 1);KEGG和GO富集分析结果显示，lncRNA-MALAT1参与肿瘤细胞信号通路PI3K/AKT途径、细胞黏附、迁移及细胞外基质生成等细胞分子生物学过程；体外VM形成能力实验结果显示，与U251及U87细胞LV-NC组比较，LV-MALAT1组VM形成数量和长度明显减少，差异有统计学意义(P<0.01);Western-blot结果显示，与U251及U87细胞LV-NC组比较，LV-MALAT1组VM相关蛋白VE-cadherin、MMP2、VEGF表达显著降低，差异有统计学意义(P<0.05);CCK-8实验结果显示，在细胞培养48 h后，与U251及U87细胞LV-NC组比较，LV-MALAT1组的细胞增长速率明显降低(P<0.000 1);划痕实验结果显示，与U251及U87细胞LV-NC组比较，LV-MALAT1组在24 h、48 h后划痕愈合面积明显减小(P<0.000 1);Transwell实验结果显示，与U251及U87细胞LV-NC组比较，LV-MALAT1组的细胞迁移和侵袭数量显著减少(P<0.001);与U251及U87细胞LV-NC组比较，LV-MALAT1组的PI3K、Phospho-PI3K、AKT、Phospho-AKT表达量显著下降，FOXO1、Phospho-FOXO1表达量显著升高(P<0.05)。结论 沉默lncRNA-MALAT1既能抑制胶质瘤细胞U251、U87血管生成拟态的能力，又可使其增殖、迁移及侵袭能力明显降低，其机制可能与PI3K/AKT/FOXO1通路表达水平变化相关。

关键词

lncRNA-MALAT1 / FOXO1 / 胶质瘤 / 血管生成拟态 / 迁移 / 侵袭