祛湿健骨方对MC3T3-E1细胞成骨分化能力的促进作用研究

摘要

目的 探讨祛湿健骨方对MC3T3-E1细胞的作用机理。方法 将祛湿健骨方配成不同浓度溶液(0.005、0.025、0.05、0.1、0.2、0.4 mg/mL),用不同浓度祛湿健骨方对细胞进行干预，干预48 h后，采用CCK-8法检测细胞增殖率，筛选最佳药物浓度。将MC3T3-E1细胞制成细胞悬液，随机分为对照组、地塞米松组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，接种至六孔板。待细胞贴壁达到80%后进行造模(对照组不添加药物；地塞米松组使用地塞米松干预；低剂量组、中剂量组、高剂量组分别用相应浓度的祛湿健骨方+地塞米松进行干预)48 h后更换为成骨诱导培养基进行培养。诱导15 d后，测定各组细胞的碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase, ALP)含量和Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨细胞特异性转录因子(Osterix, OSX)蛋白的表达量。结果 经CCK-8实验结果对比，药物筛选前3位存活率浓度为0.1 mg/mL(低浓度)、0.2 mg/mL(中浓度)、0.4 mg/mL(高浓度)。与对照组相比，地塞米松组、低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞ALP活性均降低差异有统计学意义(P<0.05);与地塞米松组相比，低剂量组、中剂量组差异无统计学意义(P>0.05),高剂量组细胞ALP活性升高，差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较，中剂量组、低剂量组、地塞米松组细胞的RUNX2、OSX蛋白表达均降低，差异有统计学意义(P<0.05),高剂量组细胞OSX和RUNX2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与地塞米松组比较，高剂量组OSX和RUNX2蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 祛湿健骨方能够促进MC3T3-E1细胞的成骨分化能力，其可能是通过调节RUNX2、OSX等骨形成相关蛋白，以此纠正骨形成与骨吸收的平衡，达到治疗骨质疏松症的作用。

关键词

MC3T3-E1细胞 / 骨质疏松症 / 成骨分化

基金资助

国家自然科学基金(81660831); 新疆医科大学研究生创新创业项目(CXCY2023010)