PD-L1/PD-L2对食管鳞癌细胞恶性表型的影响及耐药研究

摘要

目的 探讨程序性死亡配体1/2（PD-L1/PD-L2）对食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及对化疗药物的敏感性。方法 在体外食管鳞癌KYSE150细胞系水平上，分别构建PD-L1杂合子敲除细胞系，慢病毒转染PD-L2过表达，将细胞分为WT组（PD-L1野生型）和PD-L1^+/-组（PD-L1杂合子敲除）、Ctrl组（对照）和OE-PD-L2组（PD-L2过表达）,用RT-qPCR和Western blot验证PD-L1杂合子敲除和慢病毒转染PD-L2过表达效果以用于后续实验。采用EdU、细胞克隆形成实验、Transwell实验检测各组细胞增殖、迁移和侵袭能力。通过CCK8法检测细胞增殖能力并计算抑制率来评估细胞对化疗药物的敏感性。结果 与野生型WT组相比，PD-L1^+/-组细胞增殖（P<0.001）、迁移（P<0.01）和侵袭能力（P<0.05）明显降低，差异有统计学意义。与Ctrl组相比，OE-PD-L2组细胞增殖和迁移能力增加（P<0.05）,而侵袭能力无明显差异（P>0.05）。在顺铂药物梯度浓度干预下，与WT组相比较，PD-L1^+/-组细胞增殖活力明显下降，差异具有统计学意义（P<0.05）。当顺铂药物浓度为20μmol/L时，与Ctrl组相比，OE-PD-L2组细胞增殖活力无明显变化（P>0.05）,而在40μmol/L药物浓度作用下，与Ctrl组相比，OE-PD-L2组细胞增殖活力显著上升，差异有统计学意义（P<0.001）。加入不同浓度的五氟尿嘧啶后发现，与WT组相比，PD-L1^+/-组细胞增殖活力显著升高，差异有统计学意义（P<0.05）。与Ctrl组相比，OE-PD-L2组细胞增殖活力显著下降（P<0.01）。比较WT组与PD-L1^+/-组特异性表达差异的蛋白，共获得25个差异表达蛋白质，其中差异倍数最为显著的上调蛋白为EGFR（Ser1070）,下调蛋白为Smad4。结论 PD-L1能够促进食管鳞癌细胞的恶性表型；PD-L2可以促进食管鳞癌细胞（ESCC）的增殖和迁移；PD-L1/PD-L2可以影响肿瘤细胞对顺铂和五氟尿嘧啶化疗药物的敏感性。

关键词

程序性死亡配体1 / 程序性死亡配体2 / 食管鳞癌细胞 / 恶性表型 / 耐药

基金资助

国家自然科学基金地区基金项目(82360521,82260568)