miR-34a-5p在慢阻肺患者血清表达及对平滑肌细胞增殖、凋亡及对CTNNB1的调控作用

摘要

目的 探讨miR-34a-5p在慢阻肺患者血清表达及对平滑肌细胞增殖、凋亡及对CTNNB1的调控作用。方法 选取2023年1-12月于本科室就诊的稳定期慢阻肺患者50例(慢阻肺组),另选取同期于本院体检中心进行体检的健康者50例(正常组),qRT-PCR检测血清中miR-34a-5p和CTNNB1 mRNA水平，Person相关性分析miR-34a-5p和CTNNB1 mRNA相关性，ROC曲线分析miR-34a-5p和CTNNB1 mRNA的诊断价值。30只大鼠中随机选取5只为空白组，其余25只建立慢阻肺大鼠模型，提取大鼠ASMCs,将ASMCs分为空白组(正常大鼠ASMCs)、模型组(慢阻肺大鼠ASMCs)、miR-34a-5p-NC组、miR-34a-5p mimics组、miR-34a-5p siRNA组、si-CTNNB1组、miR-34a-5p mimics+si-CTNNB1组和miR-34a-5p siRNA+si-CTNNB1组。CCK-8检测各组细胞增殖率，流式细胞仪检测细胞凋亡，免疫印迹检测CTNNB1、β-catenin、Wnt1及GSK3β的水平，双荧光素酶报告基因验证miR-34a-5p和CTNNB1靶向关系。结果 慢阻肺组患者血清中miR-34a-5p表达明显低于正常组，CTNNB1 mRNA表达高于正常组(P<0.05);miR-34a-5p和CTNNB1 mRNA呈负相关性(r=-0.551,P<0.001);miR-34a-5p诊断是否发生慢阻肺的AUC值为0.912(95%CI:0.851～0.974);CTNNB1 mRNA诊断是否发生慢阻肺的AUC值为0.832(95%CI:0.775～0.909)。与空白组相比，模型组ASMCs增殖能力、CTNNB1和β-catenin蛋白表达升高，凋亡率、Wnt1和GSK3β蛋白表达降低(P<0.05);与模型组相比，miR-34a-5p mimics组和si-CTNNB1组的ASMCs增殖能力、CTNNB1和β-catenin蛋白表达降低，凋亡率、Wnt1和GSK3β蛋白表达升高(P<0.05),miR-34a-5p siRNA组呈现相反的趋势；与miR-34a-5p mimics组相比，miR-34a-5p mimics+si-CTNNB1组的ASMCs增殖能力、CTNNB1和β-catenin蛋白表达降低，凋亡率、Wnt1和GSK3β蛋白表达升高(P<0.05);与miR-34a-5p siRNA组相比，miR-34a-5p siRNA+si-CTNNB1组的ASMCs增殖能力、CTNNB1和β-catenin蛋白表达降低，凋亡率、Wnt1和GSK3β蛋白表达升高(P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示，miR-34a-5p过表达能够降低CTNNB1-WT荧光素酶活性(P<0.05)。结论 慢阻肺组患者血清中miR-34a-5p表达明显降低，并与CTNNB1呈负相关，有助于评估慢阻肺的发生，而且miR-34a-5p可以调节ASMCs的增殖和凋亡，可能与靶向调控CTNNB1的表达相关。

关键词

慢阻肺 / miR-34a-5p / CTNNB1 / 增殖 / 凋亡

基金资助

上海市黄浦区科研项目(HLZ202205)