Eg Innexin-unc9重组蛋白的表达纯化及诊断价值

摘要

目的 构建并表达纯化细粒棘球绦虫缝隙连接通道蛋白(EgInnexin unc9,EgInx)重组蛋白，制备多抗评估其诊断潜力及组织定位，为功能研究和犬用疫苗开发奠定基础。方法 通过NdeI/HindⅢ双酶切构建pET-30a-EgInx原核表达质粒；将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)在不同温度下诱导表达，利用镍亲和层析柱纯化重组EgInx蛋白(rEgInx),并通过蛋白质免疫印迹(Western blotting, WB)验证其特异性；制备多克隆抗体进行免疫组化；采用生物素-亲和素放大系统酶联免疫吸附实验(Biotin-avidin system-enzyme linked immunosorbent assay, BAS-ELISA)检测22份健康人血清及7份囊型棘球蚴病患者血清，初步评估其诊断价值。结果 成功表达并纯化rEgInx, WB检测显示其可被组氨酸标签抗体特异性识别。免疫组化表明，在胆盐诱导后EgInx在原头蚴头节及体表皮层高表达，成虫则表达在生殖系统，主要位于孕节。BAS-ELISA检测敏感度为85.71%(6/7),特异度95.45%(21/22)。结论 rEgInx具有高诊断特异性，其发育阶段差异性定位提示其参与虫体发育及繁殖调控，可作为囊型棘球蚴病(Cystic echinococcosis, CE)新型诊断标志物及犬用疫苗潜在靶点。

关键词

细粒棘球绦虫 / 重组蛋白 / 免疫诊断