芜菁酸性多糖对人肺鳞癌H226细胞自噬的影响

摘要

目的 研究芜菁酸性多糖（Acide polysaccharides from Brassica rapa L.,BPA）对人肺鳞癌细胞系NCI-H226（H226）细胞自噬的影响。方法 采用水提醇沉结合色谱技术分离纯化获得两个芜菁酸性多糖（BPA-1和BPA-2）。采用间羟基联苯法测定BPA-1、BPA-2中糖醛酸的含量并对其进行方法学考察。体外培养H226细胞，采用Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒检测BPA-1和BPA-2对H226细胞活力的影响。黄嘌呤氧化酶（Xanthine oxidase, XOD）诱导H226细胞建立自噬模型，采用单丹磺酰尸胺（Monodansylcadaverin, MDC）法通过细胞自噬染色检测试剂盒判断细胞自噬模型的建立情况。电镜下观察细胞给药前后自噬形态的变化，活性氧（Reactive oxygen, ROS）试剂盒检测细胞给药前后ROS水平的变化。结果 BPA-1和BPA-2中糖醛酸含量分别为48.1%和20.8%。CCK-8结果显示，与空白组相比，BPA-1和BPA-2组的给药浓度达到1 000μg/mL时，H226细胞活力明显降低，差异具有统计学意义（P<0.05）,且BPA-1和BPA-2的半抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration, IC₅₀)分别为1 551μg/mL和6 117μg/mL,由此确定BPA-1和BPA-2的低、中和高给药剂量浓度分别为1 000、2 000、4 000μg/mL。MDC法结果显示，与正常组相比，模型组呈强而明显的绿色荧光，且数目较多。电镜结果显示，与梭形、边缘清晰和胞质均匀透亮的正常组细胞相比，模型组细胞圆润、无棱角，胞质内容物被逐渐溶解，出现自噬小体，XOD成功诱导H226细胞自噬模型；与模型组相比，BPA-1低、中剂量组部分细胞可见棱角、部分细胞出现自噬形态，高剂量组大部分细胞呈现出正常形态，且高、中、低剂量组细胞数量均有所减少；BPA-2高剂量组细胞形态趋于正常组，且细胞数目明显减少，中剂量组细胞多呈现自噬形态，细胞数目有所减少，低剂量组的细胞数目和形态均与模型组无明显差异。ROS检测结果显示，与模型组相比，BPA-1和BPA-2低、中、高剂量组ROS含量明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）,并且具有浓度依赖性，BPA-1的效果优于BPA-2。结论 芜菁酸性多糖具有良好的抑制H226细胞生长的作用，通过降低H226细胞中ROS水平抑制细胞自噬，且BPA-1的效果明显优于BPA-2。

关键词

人肺鳞癌细胞系 / 细胞自噬 / 芜菁酸性多糖 / 糖醛酸含量