MyD88信号通路抑制对M2型巨噬细胞极化及泡型棘球蚴病肝纤维化的影响

摘要

目的 探讨阻断髓样分化因子-88（Myeloid differentiation factor-88,MyD88）信号通路后泡型棘球蚴病（Alveolar echinococcosis, AE）肝脏组织中巨噬细胞浸润程度、炎症及纤维化的相关性。方法 保种沙鼠肝脏组织中获得泡型棘球蚴原头节（Protoscoleces, PSC）,肝脏穿刺PSC分别建立泡型棘球蚴感染组（Em组）和MyD88信号通路阻断的泡型棘球蚴小鼠组（Em+TJ-M2010-5组）。通过免疫组织化学（Immunohistochemistry, IHC）和qRT-PCR分析MyD88、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）和巨噬细胞极化标志物的表达情况。体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7,棘球蚴蛋白（Echinococcus-multilocularis-Protein, Emp）刺激RAW264.7后使用TJ-M2010-5阻断MyD88信号通路，通过蛋白印记实验（Western blot, WB）和qRT-PCR检测各组巨噬细胞极化标志物和MyD88的蛋白及mRNA的表达水平，流式细胞术检测阻断MyD88信号通路后M1型巨噬细胞（F4/80⁺CD86⁺）、M2型巨噬细胞（F4/80⁺CD206⁺）比例动态变化情况。结果 与Em组相比，Em+TJ-M2010-5组MyD88 IHC阳性区域面积减少（P<0.001）,α-SMA和CD163阳性区域面积增加（P均<0.001）,诱导型一氧化氮合酶（Inducible nitric oxide synthase, INOS）和CD86阳性区域面积减少（P均<0.001）。在体外细胞实验中，与空白对照组相比，泡球蚴蛋白刺激后，MyD88通路激活，MyD88和精氨酸酶-1（Arginine-1）蛋白及mRNA表达水平均升高（P<0.01～0.05）,TJ-M2010-5干预后，MyD88及INOS的蛋白及mRNA表达水平均下降（P均<0.05）,流式细胞术检测M2型巨噬细胞（F4/80⁺CD206⁺）比例由（7.76±0.44）%升高为（17.24±0.47）%（P<0.01）,M1巨噬细胞（F4/80⁺CD86⁺）比例由（42.16±0.56）%降低为（32.35±1.15）%（P<0.01）。结论 在泡型棘球蚴病中抑制MyD88信号通路后，巨噬细胞向M2型巨噬细胞方向极化并加重肝脏纤维化。

关键词

纤维化 / MyD88/NF-κB / 巨噬细胞极化