细粒棘球蚴重组蛋白EgG1Y162诱导表达条件的优化及其蛋白结构预测

摘要

目的 探索优化重组质粒pET30a-EgG1Y162表达条件并预测其蛋白结构模型。方法 通过使用EgG1Y162原始菌种进行诱导表达，探索不同浓度异丙基硫代半乳糖苷(IPTG,sopropylβ-D-Thiogalactoside)、孵育时间对EgG1Y162蛋白诱导表达水平的影响。原始菌种经诱导表达后，通过超声处理离心得到细菌裂解液上清与沉淀，利用SDS-PAGE分析上清和沉淀中EgG1Y162重组蛋白的表达情况，分析最佳诱导表达条件；纯化蛋白，且通过Western blot鉴定抗原蛋白的表达；利用生物信息学技术预测EgG1Y162蛋白的空间结构模型。结果 EgG1Y162蛋白在28℃,IPTG终浓度为0.2 mmoL/L,诱导6 h条件下的表达量较高，蛋白相对分子质量约为25 kDa;用HisTrap纯化柱纯化蛋白，EgG1Y162蛋白在20 mmol/L咪唑浓度的洗脱下，洗脱效果较佳，可获取大量纯化蛋白；纯化蛋白能被鼠抗His-Tag抗体识别，与预期结果相符；生物信息学预测结果显示该蛋白中β折叠占5.00%,无规则卷曲占50.83%,成功构建出EgG1Y162蛋白三级结构模型。结论 通过统计学方法获得了重组蛋白EgG1Y162的最佳诱导表达及纯化条件，预测了该蛋白的空间结构，为后续大量获得细粒棘球蚴疫苗抗原蛋白EgG1Y162,进而用于研究其免疫效果与免疫机制创造了条件。

关键词

细粒棘球蚴 / EgG1Y162 / 原核表达条件优化 / 生物信息学

基金资助

新疆维吾尔自治区杰出青年基金项目(2022D01E50); 国家自然科学基金项目(32260192)