西罗莫司对TIE2-L914F突变的静脉畸形内皮细胞迁移、骨架重构和血管生成的作用研究

摘要

目的 探讨西罗莫司(RAPA)对TIE2-L914F突变的静脉畸形内皮细胞迁移、骨架重构和血管生成的影响及作用。方法 在人脐静脉内皮细胞系(HUVEC)过表达TIE2-L914F与TIE2-WT基因构建静脉畸形细胞模型(L914F组)与野生型细胞模型(WT组),HUVEC设为Control组；通过CCK-8实验检测西罗莫司药物对细胞毒性的影响，用于后期实验干预；采用细胞划痕实验检测3组细胞的迁移能力；罗丹明标记鬼笔环肽检测3组细胞的骨架结构；检测3组细胞的血管生成能力。结果 CCK-8结果显示，5 nmol/L浓度的RAPA干预12 h时，各组细胞增殖活性无明显差异。细胞划痕实验结果显示，L914F组细胞迁移能力高于Control组(P<0.000 1),RAPA干预后可有效抑制L914F组细胞的迁移能力。细胞骨架染色结果显示，L914F组细胞F-肌动蛋白(F-actin)分布异常，导致细胞形态与骨架调节失调，RAPA可以有效改善这一表现。血管生成实验结果提示，与Control组相比，L914F组、WT组细胞血管生成数量少、孔径大、形态不规则，RAPA干预后，突变内皮细胞血管生成数量增多、孔径变小、形态规则，血管生成的分支数与管腔总长度增加(P<0.01)。结论 RAPA能够针对TIE2-L914F突变的关键病理特征发挥调控作用，显著改善了内皮细胞的迁移、骨架结构和血管生成异常，为控制静脉畸形的病理进展提供了科学依据。

关键词

静脉畸形 / 西罗莫司 / 细胞骨架 / 血管生成 / PI3K-AKT-mTOR信号通路