建立UPLC-Triple-TOF-MS/MS、指纹图谱和多成分定量对复方丹参菝葜搽剂的质量评价方法

摘要

目的 基于复方丹参菝葜搽剂的成分鉴定并结合指纹图谱，建立其定量分析方法，利用体外实验进行药理活性验证，对其质量进行评价。方法 通过高效液相色谱-三重四极杆飞行时间串联质谱法(UPLC-Triple-TOF-MS/MS)对复方丹参菝葜搽剂中的成分进行鉴定；高效液相色谱法(High performance liquid chromatography, HPLC)建立复方丹参菝葜搽剂的指纹图谱及含量测定方法；应用化学计量学进一步分析，寻找影响复方丹参菝葜搽剂质量的主要化学成分；并通过体外实验测定复方丹参菝葜搽剂对A375和B16F10黑色素细胞的增殖作用、酪氨酸酶活性和黑色素含量。结果 复方丹参菝葜搽剂中共鉴定出48个成分，建立了复方丹参菝葜搽剂的指纹图谱，确认了15个共有峰，通过对照品指认出其中6个色谱峰，分别为鞣花酸、丹酚酸B、木犀草素、芒柄花素、欧前胡素和丹参酮ⅡA,其质量分数分别为28.27、43.41、0.23、0.88、1.80和0.54 mg/g。复方丹参菝葜搽剂经处理24、48和72 h后在5～100μg/mL的浓度范围内对A375细胞有促增殖作用，经处理24、48和72 h后在5～50μg/mL的浓度范围内对B16F10细胞有促增殖作用，10μg/mL时细胞增殖能力最强。与空白组相比，5～150μg/mL的复方丹参菝葜搽剂组细胞酪氨酸酶活性和黑色素含量升高，差异有统计学意义(P<0.05),其中10μg/mL时促细胞酪氨酸酶活性和黑色素积累效果最佳；鞣花酸、丹酚酸B、木犀草素、芒柄花素、欧前胡素主成分对酪氨酸酶活性有促进作用，差异有统计学意义(P<0.05);丹酚酸B、木犀草素、芒柄花素主成分对黑色素含量有促进作用，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 本文建立了UPLC-Triple-TOF-MS/MS定性鉴别结合HPLC指纹图谱并同时测定其中6种成分含量的复方丹参菝葜搽剂质量评价，可为其质量控制和药效物质基础的深入研究提供参考。

关键词

白癜风 / 复方丹参菝葜搽剂 / 高效液相色谱-三重四极杆飞行时间串联质谱 / 指纹图谱 / 质量评价