诺日布-7散HPLC指纹图谱及四种特征成分含量测定方法的建立

摘要

目的 建立诺日布-7散的高效液相色谱（High performance liquid chromatography, HPLC）指纹图谱和四种特征成分的含量测定方法。方法 采用HPLC法对10批次诺日布-7散建立指纹图谱，色谱条件为Agilent ZORBAX SB-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm, 5μm）,0.1%磷酸水溶液为水相，甲醇∶乙腈（1∶1,V/V）为有机相，梯度洗脱；检测波长为225 nm;流速为1 mL/min;柱温为30℃;进样量为5μL。采用该色谱条件对10批次诺日布-7散进行分析，标定共有峰并进行指认归属，并对没食子酸、栀子苷、异土木香内酯、土木香内酯4个特征成分进行含量测定。采用SPSS 25.0和SIMCA 18.0软件进行聚类分析（Cluster analysis, CA）、主成分分析（Principal components analysis, PCA）和偏最小二乘法-判别分析（Orthogonal partial least squares-discriminant analysis, OPLS-DA）,对制剂的整体质量进行评价。结果 10批次诺日布-7散样品中共标记20个共有峰，指认6个共有峰，分别为没食子酸、栀子苷、柯里拉京、鞣花酸、异土木香内酯、土木香内酯，相似度在0.981～0.996之间；CA分析结果显示，10批次诺日布-7散样品分为3类：S1单独聚为一类；S2、S4、S6和S7聚为一类；S3、S5、S8、S9和S10聚为一类，PCA得到3个主成分的累积方差贡献率为86.553%,其得分图显示三类样品空间分布模式与CA完全一致。OPLS-DA模型进一步验证该分类，得分图中三类样品完全分离，且成功筛选出VIP>1的7个差异标志物峰。线性试验结果表明，没食子酸、栀子苷、异土木香内酯和土木香内酯的质量浓度与色谱峰面积线性关系良好；精密度、稳定性、重复性、加样回收率均符合方法学要求。10批次制剂中没食子酸、栀子苷、异土木香内酯、土木香内酯的含量依次为0.549±0.041、8.194±0.804、1.980±0.164、1.013±0.106 mg/g。结论 本研究建立的诺日布-7散含量测定和指纹图谱方法操作简便、结果可靠，为诺日布-7散质量标准提高提供数据支撑。

关键词

诺日布-7散 / 高效液相色谱 / 含量测定 / 特征成分 / 指纹图谱