推拿联合雌二醇经PI3K/Akt/mTOR通路改善围绝经期大鼠卵巢功能

摘要

目的 探讨推拿联合雌二醇(Estradiol, E2)改善围绝经期大鼠卵巢功能的效果及机制，观察其对卵巢凋亡、血清激素、行为学及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)通路的影响。方法 36只大鼠随机分为对照组12只和模型组24只，采用去氧乙烯基环己烯(4-Vinylcyclohexene Diepoxide, VCD)诱导建立围绝经期大鼠模型，造模后两组各处死6只进行模型评估，对照组剩余6只纳入空白组，模型组18只再随机分为3组：VCD组、E2组和推拿+E2组各6只，干预4周后进行取样处理。采用Morris水迷宫评估空间学习和记忆能力；苏木精-伊红染色观察卵巢组织的病理学变化；ELISA法检测血清抗缪勒管激素(AMH)、E2和孕酮(PROG)的含量；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Pi3k、Akt、Mtor、Bcl-2、Bax基因的相对表达量；免疫组化法检测凋亡相关蛋白BCL-2和BAX蛋白的表达情况。结果 阴道涂片和卵巢组织的病理结果显示大鼠处于围绝经期状态，其卵巢的闭锁状态较为明显，Bcl-2基因表达量降低，Bax基因表达量升高，AMH、E2和PROG激素含量处于较低水平，行为学评分降低。干预后，检测卵泡状态的排序为：空白组>推拿+E2组>E2组>VCD组；推拿+E2组和E2组行为学评分优于VCD组(P<0.05),但两组间对比差异无统计学意义(P>0.05);推拿+E2组和E2组的Bcl-2和Bax表达量优于VCD组(P<0.001),但两组间对比差异无统计学意义(P>0.05)。经H-score分析，推拿+E2组BCL-2蛋白表达高于E2组(P<0.05);推拿+E2组和E2组中血清AMH、E2及PROG均高于VCD组(P<0.01),推拿+E2组中血清AMH、E2高于E2组(P<0.05),PROG含量有升高趋势但差异无统计学意义(P>0.05);推拿+E2组和E2组中Pi3k、Akt和Mtor基因表达量高于VCD组(P<0.01),推拿+E2组Pi3k和Mtor基因表达量高于E2组(P<0.05),Akt基因表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论 推拿联合E2可能通过PI3K/Akt/mTOR信号通路改善围绝经期大鼠卵巢闭锁状态，促进AMH、E2、PROG分泌，提升行为学表现，本文为推拿治疗围绝经期症状提供了一定的研究数据和治疗策略。

关键词

围绝经期 / 推拿 / 卵巢凋亡 / 性激素