骨疏康对MC3T3-E1细胞成骨分化及大鼠磨牙压低牙根吸收作用影响的研究

摘要

目的 探讨骨疏康对MC3T3-E1细胞分化及大鼠磨牙压低牙根吸收的调控作用及内在机制。方法 取6只大鼠分别于早晚灌胃骨疏康(0.26 g/kg),持续7 d,末次灌胃结束2 h内腹主动脉取血制备含药血清。采用细胞计数试剂盒-8(Cell counting kit-8,CCK8)法检测骨疏康含药血清对小鼠颅顶前骨细胞(MC3T3-E1细胞)的增殖活性。将细胞分为对照组、骨疏康含药血清组(10%骨疏康含药血清培养24 h)和骨疏康含药血清+MSAB组(Wnt/β-catenin信号通路抑制剂，10%骨疏康含药血清和5μmol/L MSAB培养24 h),采用碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase, ALP)染色、茜素红S(Alizarin red S,ARS)染色观察细胞成骨分化能力；采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,Runx2)、骨形态发生蛋白2 (Bone morphogenetic protein 2,BMP2)、无翅型MMTV整合位点家族成员3A(Wnt family member 3A,Wnt3a)和β-连环蛋白(β-catenin)的蛋白表达。取12只大鼠建立磨牙压低模型，将建模成功大鼠随机分为模型组和骨疏康组(骨疏康，2.1 g/kg,每天1次，连续4 w),每组6只，另取6只未建模大鼠为正常组；采用Western blot法检测磨牙组织Runx2、Wnt3a、β-catenin的蛋白表达水平。结果 CCK8结果显示，与对照组相比，骨疏康含药血清组的细胞增殖活性升高，差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比，骨疏康含药血清组ALP活性、ALP和ARS染色强度升高，Runx2、BMP2、Wnt3a和β-catenin的蛋白表达水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)。与骨疏康含药血清组相比，骨疏康含药血清+MSAB组ALP活性、ALP染色强度降低，Runx2和BMP2的蛋白表达水平降低，差异有统计学意义(P<0.05)。动物实验结果显示，与正常组相比，模型组磨牙组织中Runx2、Wnt3a、β-catenin的蛋白表达水平降低，差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比，骨疏康组磨牙组织中Runx2、Wnt3a、β-catenin的蛋白表达水平升高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 骨疏康通过介导Wnt/β-catenin通路促进MC3T3-E1细胞及大鼠磨牙组织的成骨分化。

关键词

骨疏康 / 成骨分化 / MC3T3-E1细胞 / 信号通路