Fosl-1对肾母细胞瘤动物模型中Wnt通路及肿瘤转移相关因子的影响

摘要

目的 探讨Fosl-1、Wnt通路及肿瘤转移相关因子与肾母细胞瘤肿瘤转移的相关性，为寻找肾母细胞瘤治疗靶点提供理论依据。方法 将慢病毒Fosl-1干扰的WIT49肾母细胞瘤细胞及Fosl-1干扰空载的WIT49细胞分别皮下接种于BALB/c-Nude雄性裸鼠以构建移植瘤模型。实验动物分为4组：对照组(皮下接种未处理的WIT49细胞)、Fosl-1干扰-NC组(皮下接种空载慢病毒转染的WIT49细胞)、Fosl-1干扰组(皮下接种Fosl-1干扰慢病毒转染的WIT49细胞)和Fosl-1干扰+Wnt抑制组(皮下接种Fosl-1干扰慢病毒转染的WIT49细胞，在接种后进行腹腔注射Wnt抑制剂FH535)。观察肿瘤生长并测量瘤体体积；采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测Fosl-1 mRNA表达；通过蛋白质免疫印迹(Western blot)检测Wnt通路关键蛋白[卷曲蛋白1(FZD1)、Wnt家族成员1(Wnt-1)、β-连环蛋白(β-catenin)]、肿瘤转移相关蛋白[基质金属蛋白酶9(MMP-9)、肿瘤转移抑制蛋白23(NM23)]及促凋亡蛋白Bax的表达；运用HE染色及免疫组织化学法观察肿瘤组织形态并检测Fosl-1蛋白表达。结果 与对照组相比，Fosl-1干扰组和Fosl-1干扰+Wnt抑制组裸鼠肿瘤体积在第13天和第16天均减小(P<0.05)。在接种细胞后第10天、第13天和第16天，与Fosl-1干扰组相比，Fosl-1干扰+Wnt抑制组裸鼠的肿瘤体积均更小，差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比，Fosl-1干扰组和Fosl-1干扰+Wnt抑制组的Fosl-1 mRNA、Wnt信号通路相关关键蛋白FZD1、Wnt-1、β-catenin及肿瘤转移相关蛋白MMP-9、NM23的表达均下降，而促凋亡蛋白Bax的表达升高(P<0.05)。HE染色结果显示，与对照组相比，Fosl-1干扰组及Fosl-1干扰+Wnt抑制组肿瘤细胞核分裂像减少，核浆比降低，间质结构更疏松，同时，空泡状细胞结构增加，尤其Fosl-1干扰+Wnt抑制组空泡状细胞结构增加更明显。免疫组化检测结果显示，与对照组相比，Fosl-1干扰组和Fosl-1干扰+Wnt抑制组中Fosl-1蛋白的表达量均降低，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 抑制Fosl-1能有效延缓肾母细胞瘤的生长并降低肿瘤转移相关因子的表达。联合抑制Wnt通路能进一步增强对肿瘤生长的抑制作用，提示Fosl-1在肾母细胞瘤中的作用可能依赖于Wnt/β-catenin信号通路。

关键词

Fosl-1 / 肾母细胞瘤 / Wnt通路 / 肿瘤转移