BAD与DAD1在食管鳞癌细胞的表达及调控关系

摘要

目的 探究BCL2细胞死亡拮抗因子(BAD)是否参与抗细胞凋亡因子(DAD1)基因表达的调控。方法 应用蛋白质免疫印迹(WB)检测BAD与DAD1在食管鳞癌细胞中的本底表达水平，筛选合适细胞系。选用ECA-109与KYSE-450细胞，结合CCK-8与WB确定BAD激动剂达匹维林的诱导条件，并验证蛋白表达变化。进一步通过免疫荧光观察亚细胞共定位，并利用染色质免疫共沉淀-聚合酶链式反应(ChIP-PCR)分析BAD与DAD1启动子的结合情况。结果 在ECA-109与KYSE-450细胞中，BAD的表达水平低于其他细胞系，而DAD1的表达则相对较高。达匹维林可有效诱导上述细胞中BAD的表达，其最佳干预浓度与时间分别为：ECA-109(8μmol/L),KYSE-450(16μmol/L),干预24 h。在此条件下，DAD1蛋白表达随之下降。回复实验证实，激活BAD可下调DAD1表达，沉默BAD则上调DAD1表达；单独沉默DAD1对BAD表达无影响；共同沉默BAD和DAD1后，沉默BAD可特异性回复DAD1的表达，BAD对DAD1具有负向调控作用。免疫荧光共定位显示，与未处理的对照组细胞相比，BAD在细胞质表达的荧光信号明显增强，并且在细胞核中也观察到其表达，提示BAD发生了核转位。同时，DAD1表达的荧光信号呈现减弱趋势。ChIP-PCR实验表明，BAD可以与DAD1的启动子区上游-548至-288的DNA片段结合，同时BAD还可以与DAD1的启动子区上游-751至-623的DNA片段结合。结论 在食管鳞癌中，BAD可能通过结合至DAD1基因的启动子区域实现对DAD1的负向调控。

关键词

BAD / DAD1 / 食管鳞癌