铜绿假单胞菌致小鼠脓毒症肝损伤模型的建立

摘要

目的 建立铜绿假单胞菌致小鼠脓毒症肝损伤模型。方法 选取清洁级（SPF）雄性Balb/c小鼠180只，6～8周龄，随机平均分为Control组、0.5×10～9CFU/mL组、1.0×10～9CFU/mL组、1.5×10～9CFU/mL组、2.0×10～9CFU/mL组和2.5×10～9CFU/mL组。Control组小鼠腹腔注射100μL生理盐水，其余实验组小鼠腹腔注射同体积不同浓度的铜绿假单胞菌诱导脓毒症肝损伤进行建模。模型建立24 h后，统计实验组小鼠的死亡率；采集6组小鼠外周血样本进行细菌定量培养及菌落计数分析；采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠血清中的炎性因子白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和肝功能指标丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）及胆红素（Bilirubin）水平。此外，获取的肝组织样本经10%中性甲醛溶液固定24 h后，进行苏木精-伊红（HE）染色。结果 与Control组相比，1.0×10～9CFU/mL组、1.5×10～9CFU/mL组、2.0×10～9CFU/mL组及2.5×10～9CFU/mL组血液含菌量升高（P均<0.01）。各组小鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α、AST、ALT、Bilirubin水平差异有统计学意义（P均<0.000 1）。与Control组相比，1.0×10～9CFU/mL组、1.5×10～9CFU/mL组、2.0×10～9CFU/mL组及2.5×10～9CFU/mL组IL-1β、IL-6、TNF-α、AST、ALT、Bilirubin水平升高（P均<0.001）。1.5×10～9CFU/mL组、2.0×10～9CFU/mL组、2.5×10～9CFU/mL实验组小鼠肝脏均出现显著炎性细胞浸润现象，而Control组肝组织结构完整，未见病理性改变。结论 1.0×10～9CFU/mL组、1.5×10～9CFU/mL组及2.0×10～9CFU/mL组诱导脓毒症肝损伤模型损伤严重，小鼠存活率分别为90%、51%和0%,分别可作为诱导脓毒症肝损伤模型的最小致死剂量(LD₀₁)、半数致死量(LD₅₀)和绝对致死剂量(LD₁₀₀)。依据实验需求，均可用于研究脓毒症炎症风暴阶段的动物模型。

关键词

铜绿假单胞菌 / 脓毒症 / 肝损伤模型 / 炎性因子 / 肝脏损伤标志物