R-(+)-长叶薄荷酮抗耐药菌感染的免疫调节作用研究

摘要

目的 探讨R-（+）-长叶薄荷酮(R-（+）-pulegone, PU)对多重耐药大肠埃希菌（Multi-drug-resistant Escherichia coli,MDR E.coli）急性腹腔感染小鼠的抗感染免疫调节作用。方法 将小鼠随机分为正常对照组（20 mL/kg玉米油）、模型组（20 mL/kg玉米油）、PU剂量组（低、中、高剂量分别是0.5、1、1.5 mg/mL）及阳性药物对照组（1.3 mg/mL头孢克肟）,连续灌胃3 d, 1次/d。第3天给药1 h后，正常对照组腹腔注射生理盐水，模型组、PU剂量组、阳性药物对照组分别按照10 mL/kg腹腔注射3.0×10～8CFU/mL MDR E.coli菌液。采用全自动血细胞分析仪检测外周血、腹腔冲洗液中的白细胞计数；采用流式细胞仪检测外周血中免疫细胞的比例；采用酶联免疫吸附法检测血清中白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-alpha, TNF-α）、白细胞介素-1β（Interleukin-1 beta, IL-1β）、干扰素-γ （Interferon-γ,IFN-γ）、白细胞介素-17A（Interleukin-17A,IL-17A）、白细胞介素-4（Interleukin-4,IL-4）、白细胞介素-10（Interleukin-10,IL-10）炎症因子的表达水平；采用苏木精-伊红染色观察小鼠腹膜组织的病理变化；采用平板菌落计数检测小鼠腹腔冲洗液MDR E.coli的细菌载量。结果 与正常对照组比较，模型组死亡率（90%）升高，体重下降，外周血及腹腔冲洗液白细胞计数增高，外周血CD45⁺白细胞、CD3⁺ T细胞、NK1.1⁺ NK细胞、CD11b⁺中性粒细胞比例升高，CD3^-CD19⁺ B细胞比例降低；血清IL-6、TNF-α、IL-1β、IFN-γ、IL-17A、IL-4水平均升高，IL-10水平降低（P均<0.05）,腹膜组织出现结构紊乱、间质水肿及大量炎症细胞浸润，腹腔冲洗液MDR E.coli的细菌载量增多。与模型组比较，PU低、中、高剂量组及阳性药物对照组死亡率降低（20%、40%、40%、50%）,体重升高，外周血及腹腔冲洗液白细胞计数下降；PU剂量组CD3⁺CD8⁺ T细胞、CD3^-CD19⁺ B细胞比例均升高；CD45⁺白细胞、NK1.1⁺ NK细胞比例均降低；IL-10水平升高，IL-6、TNF-α、IL-1β、IFN-γ、IL-17A水平降低（P均<0.05）;阳性药物对照组CD45⁺白细胞、NK1.1⁺ NK细胞比例降低，TNF-α、IL-10水平升高，IL-6、IL-1β、IFN-γ、IL-17A、IL-4水平均降低（P均<0.05）;PU剂量组及阳性药物对照组小鼠腹膜病理损伤减轻、腹腔冲洗液MDR E.coli的细菌载量减少。与阳性药物对照组比较，PU剂量组小鼠死亡率、外周血白细胞计数均下降，PU中、高剂量组小鼠腹腔冲洗液白细胞计数均下降；PU剂量组CD3⁺CD8⁺T细胞比例均升高，中、高剂量组CD45⁺白细胞比例均降低；PU剂量组的IL-4水平升高，IL-6、TNF-α、IL-1β水平均降低，中、高剂量组小鼠腹膜组织紊乱程度降低，水肿程度降低，坏死区范围减小，炎症细胞浸润数量减少，腹腔冲洗液MDR E.coli的细菌载量明显减少。结论 PU通过调控免疫细胞亚群及炎症因子，显著缓解MDR E.coli腹腔感染所致的急性炎症与组织损伤，其抗感染效果具有剂量依赖性，展现出其作为抗耐药菌感染的新型免疫调节候选药物的潜力。

关键词

R-(+)-长叶薄荷酮 / 耐药菌 / 感染 / 免疫调节