基于细胞自噬探讨天香丹通过AIM2炎性小体改善ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化的机制

摘要

目的 探讨天香丹（TXD）通过黑素瘤缺乏因子2（AIM2）炎性小体调控细胞自噬改善脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠动脉粥样硬化的作用机制。方法 选取ApoE^-/-小鼠50只为研究对象，10只作为空白对照（CO组）,其余40只给予高脂饲料喂养12周，建立动脉粥样硬化（AS）小鼠模型。将造模成功AS小鼠按随机数字表法分为MD组（等量生理盐水灌胃）、TXD组（2.72 g/kg天香丹灌胃）、核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域亚家族成员3基因敲除(NLRP3^-/-)组（NLRP3敲除，等量生理盐水灌胃）,组蛋白去乙酰化酶抑制剂（RGFP966）组（400μg/kg RGFP966灌胃）,每天灌胃1次，持续12周。CO组不进行干预。苏木精-伊红（HE）及马松（Masson）染色后在扫描光学显微镜下观察5组小鼠动脉粥样硬化病理变化，并通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-1β）水平，蛋白质免疫印迹（WB）检测AIM2、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、微管相关蛋白1轻链3（LC3）II/I、酵母自噬相关基因6同源物（Beclin 1）、IL-1β、IL-18蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）检测AIM2 mRNA表达。结果 与CO组比较，MD组小鼠主动脉斑块形成，管腔面积变小，胶原纤维排列紊乱，部分斑块出现破裂或不完整，血清IL-1β、IL-18水平升高（P<0.05）,主动脉组织中LC3II/I、Beclin 1表达下降，AIM2、p-mTOR/mTOR、IL-1β、IL-18蛋白和AIM2 mRNA表达升高（P<0.05）。与MD组比较，TXD组、NLRP3^-/-组及RGFP966组小鼠动脉内膜增厚，管腔无明显狭窄，胶原纤维排列有序、无斑块破裂，其中TXD组管腔更大、胶原纤维排列更紧密；同时，TXD组、NLRP3^-/-组及RGFP966组小鼠血清中IL-1β、IL-18降低，主动脉组织中LC3 II/I、Beclin 1表达升高，AIM2、p-mTOR/mTOR、IL-1β、IL-18蛋白和AIM2 mRNA表达降低（P<0.05）。与RGFP966组比较，TXD组小鼠主动脉组织中p-mTOR表达降低（P<0.05）。与NLRP3^-/-组比较，TXD组小鼠血清IL-1β和IL-18水平降低，主动脉组织中AIM2、p-mTOR、IL-1β、IL-18蛋白表达下降，LC3-II/I和Beclin 1蛋白表达升高，AIM2 mRNA表达降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 天香丹可改善ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化，其机制可能与AIM2调节细胞自噬有关。

关键词

天香丹 / 细胞自噬 / AIM2炎性小体 / 动脉粥样硬化

基金资助

新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(2024D01B01); 国家自然科学基金项目(82274480,82060861); 新疆维吾尔自治区研究生创新项目(XJ2024G180)