雷公藤红素通过AKT/mTORC1通路调控自噬抑制低氧诱导下大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡抵抗的研究

摘要

目的 探讨雷公藤红素（Celastrol, CEL）通过抑制蛋白激酶B（Protein kinase B,AKT）/雷帕霉素机制靶标复合物1（Mechanistic target of rapamycin complex 1,mTORC1）缓解氯化钴（Cobalt chloride, CoCl₂）刺激低氧诱导的原代肺动脉平滑肌细胞（Pulmonary artery smooth muscle cells, PASMCs）凋亡抵抗作用。方法 用胶原酶消化分离大鼠PASMCs,以CoCl₂诱导构建体外低氧PASMCs增殖细胞模型。分别检测CEL对PASMCs细胞活性、凋亡及迁移能力的影响。在不同时间段（0、6、12、24 h）用CoCl₂刺激后，检测相关蛋白[AKT、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白调节相关蛋白（Raptor）、微管相关蛋白1A/1B轻链3B（LC3B）、P62、增殖细胞核抗原（PCNA）]的表达量变化。随后将细胞分为5组：常氧对照（Normoxic control, NC）组、NC+CEL组、CoCl₂组、CoCl₂+CEL组、CoCl₂+CEL+mTORC1激活剂（MHY1485）组，检测各组自噬及凋亡相关蛋白表达水平变化。结果 CEL可以减弱原代PASMCs迁移能力（P<0.05）并促进其凋亡（P<0.05）。在CoCl₂诱导PASMCs的低氧模型中，p-AKT、Raptor、PCNA蛋白表达及LC3BII/LC3BI比值上调（P<0.05）,而Cleaved Caspase3、P62蛋白表达下调（P<0.05）。用CEL分别干预NC组与CoCl₂组后，p-AKT、Raptor、P62蛋白表达下调（P<0.05）,而Cleaved Caspase3、LC3BII/LC3BI比值进一步上调（P<0.05）。最后，mTORC1激动剂MHY1485刺激后，Cleaved Caspase3蛋白表达、LC3BII/LC3BI比值下调（P<0.05）,而p-mTOR、P62蛋白表达上调（P<0.05）。结论 雷公藤红素通过调节AKT/mTORC1通路诱导自噬而抑制CoCl₂诱导低氧原代大鼠PASMCs的凋亡抵抗和迁移。

关键词

雷公藤红素 / 肺动脉平滑肌细胞 / AKT/mTORC1 / 细胞自噬 / 细胞凋亡