MED12通过调控铁死亡促进胃癌KATOⅢ细胞增殖与侵袭的机制

摘要

目的 探讨中介体复合物亚基12（MED12）通过调控铁死亡影响胃癌KATOⅢ细胞增殖与侵袭的分子机制，为胃癌治疗提供潜在靶点。方法 构建MED12过表达（MED12 OE）和敲减（MED12 siRNA）的KATOⅢ细胞模型，设Control组、空载对照组（OE-NC、siRNA-NC）及MED12敲减联合铁死亡抑制剂Ferrostatin-1干预组（MED12 siRNA+Fer）。定量聚合酶链反应（Quantitative polymerase chain reaction, qPCR）和蛋白质印迹（Western blot, WB）验证转染效率；CCK-8检测细胞增殖；Transwell检测侵袭能力；流式细胞术检测活性氧（ROS）水平；生化试剂盒检测亚铁离子(Ferrous ion, Fe²⁺)、还原型谷胱甘肽（Reduced glutathione, GSH）含量；WB检测谷胱甘肽过氧化物酶4（Glutathione peroxidase 4,GPX4）表达。结果 与Control组相比，MED12 OE组MED12mRNA表达升高（P<0.05）, OE-NC组差异无统计学意义（P>0.05）;MED12 siRNA-1/2/3组mRNA表达均降低（均P<0.05）,siRNA-1组敲减效率最高；与Control组相比，MED12 OE组MED12蛋白表达升高，MED12 siRNA-1组的MED12蛋白表达降低（P<0.05）。与siRNA-NC组相比，MED12 siRNA组细胞活力、GSH含量及GPX4蛋白表达降低，Fe²⁺浓度、ROS荧光强度升高（P<0.05）;与OE-NC组相比，MED12 OE组细胞活力、GSH含量及GPX4蛋白表达升高，Fe²⁺浓度、ROS荧光强度降低（P<0.05）;siRNA-NC组与OE-NC组相比差异无统计学意义（P>0.05）。Ferrostatin-1干预后，与siRNA-NC组相比，MED12 siRNA组细胞活力降低（P<0.05）;与MED12 siRNA组相比，MED12 siRNA+Fer组细胞活力回升（P<0.05）;与siRNA-NC组相比，MED12 siRNA组侵袭细胞数减少（P<0.05）;与MED12 siRNA组相比，MED12 siRNA+Fer组侵袭细胞数增加（P<0.05）。结论 MED12通过激活GPX4/GSH抗氧化轴、抑制铁死亡，进而促进胃癌细胞的增殖与侵袭。铁死亡是介导MED12促癌功能的关键环节。

关键词

MED12 / 胃癌 / KATOⅢ细胞 / 铁死亡 / 细胞增殖 / 细胞侵袭