芪茵颗粒通过PINK1/Parkin通路调控线粒体自噬改善MASLD的机制研究

摘要

目的 探讨芪茵颗粒(Qiyin granules, QYG)对代谢相关脂肪性肝病(Metabolic associated steatotic liver disease, MASLD)细胞模型PTEN诱导激酶1(PTEN induced putative kinase 1, PINK1)和帕金森病蛋白2(Parkinson disease protein 2, Parkin)构成的PINK1/Parkin通路介导的线粒体自噬的影响。方法 将L02细胞用不同终浓度的油酸(Oleic acid, OA)与棕榈酸(Palmitic acid, PA)混合液(2∶1)诱导培养24 h以构建MASLD细胞模型；通过细胞计数试剂盒-8(Cell counting Kit-8, CCK-8)法筛选最佳造模浓度；油红O染色鉴定模型构建效果；制备QYG冻干粉后，通过CCK-8法筛选出各剂量QYG及硫普罗宁干预游离脂肪酸(Free fatty acids, FFA)诱导的L02细胞的最佳作用浓度并分为6组，空白组(不处理)、模型组(FFA诱导后的细胞)、QYG低剂量组(QYG浓度为250μg/mL)、QYG中剂量组(QYG浓度为500μg/mL)、QYG高剂量组(QYG浓度为750μg/mL)和硫普罗宁组(硫普罗宁浓度为750μg/mL);油红O染色检测各组细胞内脂滴的形成情况；酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)法检测各组细胞内甘油三酯(Triglyceride, TG)、总胆固醇(Total cholesterol, TC)、丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase, ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase, AST)含量；透射电镜下观察各组细胞线粒体及其自噬变化；逆转录实时荧光定量聚合酶链式反应(Reverse transcription quantitative real-time polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测各组细胞中的VDAC1、COXⅣ、TOM20、PINK1、Parkin、Beclin1、LC3、P62 mRNA表达水平。结果 与空白组比较，模型组油红O染色可见细胞内脂滴大量积聚，细胞内的脂滴面积显著上升(P<0.05),TC、TG、AST、ALT含量均显著升高(P<0.05);透射电镜下细胞超微结构显著异常；VDAC1、COXⅣ、TOM20、P62 mRNA相对表达量均升高(P<0.05),PINK1、Parkin、Beclin1、LC3 mRNA相对表达量均降低(P<0.05)。与模型组比较，QYG低、中、高剂量组和硫普罗宁组细胞内的脂滴面积均显著下降(P<0.05),TC、TG、AST、ALT含量均明显下降(P<0.05);透射电镜下可见QYG低剂量组细胞超微结构仍存在明显异常，QYG中、高剂量组细胞超微结构仅轻度异常，硫普罗宁组细胞超微结构呈部分恢复状态；QYG低、中、高剂量组和硫普罗宁组VDAC1、COXⅣ、TOM20、P62 mRNA相对表达量降低(P<0.05),PINK1、Parkin、Beclin 1、LC3 mRNA相对表达量上升(P<0.05)。结论 QYG可能通过调控PINK1/Parkin信号通路，促进线粒体自噬，从而改善MASLD肝细胞脂质沉积和线粒体损伤。

关键词

代谢相关脂肪性肝病 / 芪茵颗粒 / 线粒体自噬 / 作用机制

基金资助

国家中医药管理局全国名老中医药专家传承工作室建设项目(国中医人教发[2019-41]号); 新疆“十四五”中医学重点学科(新教函[2022]112号)