过表达基本转录因子3上调磷酸甘油酸脱氢酶表达对食管鳞状细胞癌细胞增殖的影响

摘要

目的 探讨基本转录因子3(Basic transcription factor 3,BTF3)是否通过上调磷酸甘油酸脱氢酶(Phosphoglycerate dehydrogenase, PHGDH)影响食管鳞癌(Esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)细胞增殖。方法 在对数生长期的ESCC细胞系(TE-1和Eca109)中，构建BTF3过表达组(BTF3 OE,转染BTF3过表达慢病毒)、PHGDH敲低组(分别从3个不同位点敲低PHGDH,标记为PHGDH KD1、KD2、KD3,转染相应敲低慢病毒),以及相应的阴性对照组(NC组),采用免疫印迹法(Western blot)检测BTF3及PHGDH蛋白的相对表达量，验证BTF3与PHGDH之间上下游调控关系。进一步设立双转慢病毒组(BTF3 OE+PHGDH KD1或KD3),通过Western blot法检测各组BTF3及PHGDH蛋白的相对表达量。利用多重免疫荧光技术验证BTF3与PHGDH在细胞内的共定位关系。在细胞水平结合CCK-8和克隆形成实验，系统评估在BTF3过表达背景下敲低PHGDH对ESCC细胞增殖的影响。结果 在TE-1和Eca109细胞中，BTF3过表达组的PHGDH蛋白相对表达量高于相应阴性对照组细胞(P<0.05),而PHGDH敲低(KD1、KD2、KD3)后，BTF3蛋白相对表达量与对照组相比，差异无统计学意义(P>0.05),提示BTF3位于PHGDH上游并调控PHGDH的表达水平。多重免疫荧光证实BTF3与PHGDH共定位于细胞质。CCK-8和克隆形成实验表明，在TE-1和Eca109中过表达BTF3能显著增强ESCC细胞的增殖和克隆形成能力(P均<0.05),在BTF3过表达背景下共转染PHGDH敲低慢病毒(KD1或KD3),BTF3的促增殖及促克隆形成效应被明显逆转(P均<0.05)。结论 过表达BTF3可上调PHGDH表达，且其促进ESCC细胞增殖的作用依赖于PHGDH。本研究揭示了BTF3-PHGDH轴在ESCC增殖中的重要作用。

关键词

基本转录因子3 / 磷酸甘油酸脱氢酶 / 食管鳞状细胞癌 / 共定位 / 增殖

基金资助

国家自然科学基金地区基金项目(82560589); 省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室开放课题项目(SKL-HIDCA-2024-SG2)