USP11-HDAC1轴调控黑色素瘤侵袭及M2型巨噬细胞极化的机制研究

摘要

目的 探索泛素特异性蛋白酶11（USP11）和组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）在黑色素瘤发生发展中的作用及机制。方法 从GEO数据库（GSE35389）筛选候选基因，结合UbiBrowser网站预测锁定HDAC1和USP11;运用蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测细胞中二者蛋白水平，构建干扰USP11细胞株，通过免疫共沉淀（Co-IP）实验探究其与HDAC1互作及对HDAC1泛素化的影响；利用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷（EdU）、平板克隆、Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力；佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯（PMA）诱导人单核细胞白血病细胞（THP-1）为巨噬细胞，观察黑色素瘤细胞对巨噬细胞极化和迁移的影响。结果 与正常黑色素细胞HEMa-LP相比，黑色素瘤A375细胞中USP11和HDAC1蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。USP11能够与HDAC1互作，且与sh-NC组相比，sh-USP11组HDAC1蛋白水平和蛋白稳定性降低（P<0.05）,而HDAC1的泛素化水平升高（P<0.05）。与sh-NC+oe-NC组相比，sh-USP11+oe-NC组中USP11和HDAC1蛋白水平、EdU阳性细胞数、克隆数、迁移和侵袭水平显著降低（P<0.05）;与sh-USP11+oe-NC组相比，sh-USP11+oe-HDAC1组中HDAC1蛋白水平、EdU阳性细胞数、克隆数、迁移和侵袭水平显著升高（P<0.05）,而USP11蛋白水平差异无统计学意义（P>0.05）。在共培养实验中，与A375_sh-NC+oe-NCCM组相比，A375_{sh-USP11+oe-NC}CM组中CD206⁺巨噬细胞率、CD206和ARG1的mRNA水平、巨噬细胞迁移水平降低（P<0.05）,而iNOS的mRNA水平升高（P<0.05）;与A375_{sh-USP11+oe-NC}CM组相比，A375_{sh-USP11+oe-HDAC1}CM组中CD206⁺巨噬细胞率、CD206和ARG1的mRNA水平、巨噬细胞迁移水平升高（P<0.05）,而iNOS的mRNA水平降低（P<0.05）。结论 本研究揭示USP11-HDAC1轴在黑色素瘤细胞及巨噬细胞M2相关标志物表达相关过程中起重要调控作用，为黑色素瘤治疗提供了新靶点和理论依据。

关键词

黑色素瘤 / 泛素化 / 巨噬细胞极化 / 恶性进展

基金资助

新疆维吾尔自治区卫生健康科研基金项目(2025001QNKYXM650027539); 新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(2022D01C803)