Tim-3/Gal-9介导活动性肺结核患者巨噬细胞极化的作用机制研究

摘要

目的 研究T细胞免疫球蛋白黏蛋白结构域蛋白3（Tim-3）及半乳糖凝集素-9（Gal-9）在活动性肺结核患者中的表达情况，并进一步阐明Tim-3/Gal-9调控巨噬细胞M2极化参与活动性结核病免疫耐受的潜在机制。方法 收集活动性肺结核（ATB）患者、潜伏性肺结核（LTBI）患者及健康对照者（Control）各30例。流式细胞术检测不同组研究对象外周血CD4⁺Tim-3⁺细胞、M1/M2型巨噬细胞阳性比例，酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清白细胞介素-10（IL-10）及干扰素-γ（IFN-γ）含量；收集10例ATB患者的病灶近端组织及远端对照组织，通过免疫组织化学染色检测Tim-3、Gal-9、CD86及CD206阳性表达面积，免疫荧光共定位染色检测Tim-3与M1/M2巨噬细胞相关标志物共定位阳性区域面积。构建耻垢分枝杆菌（M.s）与RAW264.7细胞共培养模型，并利用FG-3164阻断Tim-3/Gal-9通路，采用蛋白质印迹（WB）和实时定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测组织和细胞中Tim-3、Gal-9、CD86及CD206蛋白及mRNA相对表达量。结果 与Control组相比，LTBI组外周血CD4⁺Tim-3⁺细胞、M1/M2型巨噬细胞阳性比例及血清IL-10、IFN-γ水平均升高；与LTBI组相比，ATB组CD4⁺Tim-3⁺细胞、M2型巨噬细胞阳性比例及IL-10、IFN-γ水平进一步升高，M1型巨噬细胞阳性比例降低（P<0.05）。病灶近端组Tim-3、Gal-9、CD86及CD206阳性表达面积、mRNA及蛋白相对表达量均高于远端对照组；病灶近端组Tim-3/CD206共定位阳性区域面积高于同组Tim-3/CD68共定位阳性区域面积（P<0.05）。M.s刺激后Tim-3、Gal-9、CD86与CD206 mRNA及蛋白相对表达量升高，FG-3165干预后Tim-3、Gal-9与CD206 mRNA及蛋白相对表达量降低，CD86 mRNA及蛋白相对表达量升高（P<0.05）。结论 ATB中存在Tim-3/Gal-9通路异常激活，并伴随巨噬细胞向M2型极化偏移。M.s感染可上调该通路并驱动M2极化，而阻断Tim-3/Gal-9信号则能逆转该失衡，促使巨噬细胞转向M1表型。Tim-3/Gal-9通路可能是介导ATB免疫抑制和巨噬细胞极化失衡的关键环节，有望成为结核病免疫干预的新靶点。

关键词

活动性肺结核 / T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域蛋白3 / 半乳糖凝集素-9 / 巨噬细胞极化 / 免疫耐受

基金资助

省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室开放项目(SKL-HIDCA-2024-CJ6)