鹿茸多肽对环磷酰胺致卵巢早衰颗粒细胞的保护机制研究

摘要

目的 探讨鹿茸多肽(Velvet antler polypeptide,VAP)对环磷酰胺(Cyclophosphamide, CTX)诱导人卵巢颗粒细胞(KGN)损伤的保护作用及分子机制。方法 本研究以KGN细胞为实验对象，首先，通过CCK-8法检测不同浓度(0、10、20、40、80、160、320μg/mL)的VAP对CTX处理后细胞活性的影响，以确定VAP的最适干预浓度。随后，实验分为空白对照组、CTX组以及CTX+VAP低、中、高剂量组。使用CCK-8法检测细胞增殖能力。采用Annexin V-PE/7-AAD双染法，通过流式细胞仪检测细胞凋亡率。通过PI/RNase染色后，利用流式细胞术分析细胞周期分布。采用β-半乳糖苷酶染色法，在显微镜下计算阳性细胞占比以评估细胞衰老。使用DCFH-DA探针(终浓度10μmol/L)孵育后，通过流式细胞仪检测活性氧(ROS)荧光强度。采用比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及谷胱甘肽(GSH)的水平，并用BCA法校正蛋白浓度。采用ELISA法检测细胞上清中卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、抗缪勒管激素(AMH)、雌二醇(E2)、抑制素B(INH-B)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、白介素-2(IL-2)以及色素上皮衍生因子(PEDF)、血管内皮生长因子(VEGF)的含量。结果 与空白对照组比较，CTX组细胞增殖率降低，凋亡率、衰老阳性率及G0/G1期细胞比例升高，G2/M期细胞比例降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。与CTX组比较，VAP中、高剂量组细胞增殖率显著升高(P<0.05),各剂量组细胞凋亡率均降低(P<0.05),中、高剂量组细胞衰老阳性率降低、G2/M期细胞比例升高(P<0.05),且高剂量组衰老阳性率显著低于中剂量组(P<0.05)。在氧化应激方面，VAP各剂量组ROS水平均降低(P<0.05),VAP中、高剂量组SOD、GSH-Px活力及GSH含量升高、MDA含量降低(P<0.05),CAT活力各剂量组间差异无统计学意义(P>0.05)。在激素分泌方面，VAP各剂量组FSH、LH水平降低，AMH、E2及INH-B水平升高(P<0.05),其中高剂量组AMH、E2及INH-B水平高于低剂量组(P<0.05)。在炎症因子方面，VAP各剂量组IFN-γ、TNF-α、IL-1β及IL-6水平降低，IL-2水平升高(P<0.05),且高剂量组IL-2水平高于中剂量组(P<0.05)。此外，VAP各剂量组PEDF及VEGF水平均升高(P<0.05),中剂量组PEDF水平高于低剂量组(P<0.05),而VEGF水平在各VAP剂量组间差异无统计学意义(P>0.05)。提示VAP可通过协同调控氧化应激、炎症反应及内分泌功能，多靶点拮抗CTX诱导的颗粒细胞损伤。结论 VAP可有效抑制CTX诱导的颗粒细胞凋亡，减轻其细胞毒性作用。其机制与增强颗粒细胞的抗氧化能力、明显改善细胞内氧化应激状态有关。

关键词

鹿茸多肽 / 卵巢早衰 / 卵巢颗粒细胞 / 色素上皮衍生因子 / 血管内皮生长因子

基金资助

省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室开放课题基金项目(SKL-HIDCA2024-GX4); 新疆医科大学第五临床医学院青年科研启航项目(XYDWFY-ZR-202314)