雷公藤红素调节SIRT1/AMPK/mTOR信号通路对H2O2诱导心肌细胞自噬和凋亡的影响

摘要

目的 探讨雷公藤红素（CSL）调节沉默信息调节因子2同系物1（SIRT1）/单磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶标（mTOR）信号通路对过氧化氢（H₂O₂）诱导心肌细胞自噬和凋亡的影响。方法 以人心肌细胞AC16为研究对象，将其分为对照（ctrl）组、H₂O₂组、低剂量CSL（L-CSL）组、中剂量CSL（M-CSL）组、高剂量CSL（H-CSL）组、SIRT1抑制剂（EX527）组。EdU染色检测细胞增殖；Hochest 33 258染色法检测细胞凋亡；mRFP-GFP-LC3染色检测细胞自噬；酶联免疫吸附测定法检测活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）水平；蛋白质印迹检测SIRT1/AMPK/mTOR信号通路（SIRT1、p-AMPK/AMPK、p-mTOR/mTOR）、自噬[微管相关蛋白1A/1B-轻链3（LC3）Ⅱ/Ⅰ、p62]、凋亡[B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）]相关蛋白表达。结果 H₂O₂组EdU阳性细胞率、SOD、SIRT1、p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/Ⅰ、Bcl-2低于ctrl组，凋亡率、ROS、p-mTOR/mTOR、p62、Bax高于ctrl组（P<0.05）；与H₂O₂组比较，L-CSL组、M-CSL组、H-CSL组EdU阳性细胞率、SOD、SIRT1、p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/Ⅰ、Bcl-2升高，凋亡率、ROS、p-mTOR/mTOR、p62、Bax降低，且随着CSL浓度增加呈逐渐上升或下降的趋势（P<0.05）;EX527组EdU阳性细胞率、SOD、SIRT1、p-AMPK/AMPK、LC3Ⅱ/Ⅰ、Bcl-2低于H-CSL组，凋亡率、ROS、p-mTOR/mTOR、p62、Bax高于H-CSL组（P<0.05）。H₂O₂处理抑制了自噬溶酶体和自噬体的形成，CSL促进AC16细胞的自噬，EX527抑制AC16细胞的自噬。结论 CSL可促进H₂O₂诱导心肌细胞自噬，抑制细胞凋亡，其机制可能是通过激活SIRT1/AMPK/mTOR信号通路实现的。

关键词

雷公藤红素 / 沉默信息调节因子2同系物1 / 单磷酸腺苷活化蛋白激酶 / 哺乳动物雷帕霉素靶标 / H₂O₂ / 心肌细胞 / 自噬 / 凋亡