基于NF-κB与NRF2/ARE通路探索紫杉醇-比伐卢定介入涂层抗血管再狭窄的有效性及分子机制

摘要

目的 明确紫杉醇-比伐卢定介入涂层（Luo Fengning,LFN）对管腔再狭窄的影响及分子机制。方法 体内动物实验分组：WT假手术组、WT血管拉伤组、NRF2^-/-血管拉伤组、NF-κB^-/-血管拉伤组、WT血管拉伤+LFN干预组、NRF2^-/-血管拉伤+LFN干预组、NF-κB^-/-血管拉伤+LFN干预组；体外细胞实验分组：第一批分组：Control组、LPS造模组、 LPS+LFN组、 LPS+LFN+NF-κB敲减组、 LPS+LFN+IκB敲减组、 LPS+LFN+NF-κB过表达组、LPS+LFN+IκB过表达组。第二批分组：Control组、LPS造模组、LPS+LFN组、LPS+LFN+NRF2敲减组、LPS+LFN+Keap1敲减组、LPS+LFN+NRF2过表达组、LPS+LFN+Keap1过表达组。采用HE染色法检测血管组织病理变化、免疫荧光染色检测血管组织增殖活性、CCK-8法检测细胞增殖率、Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力、Q-PCR和Western blot法测定血管组织和细胞中NF-κB与NRF2/ARE通路关键靶标及配体的基因和蛋白表达。结果 LFN对血管拉伤模型大鼠的血管内膜增生过程具有显著抑制作用，可在有效阻断管腔再狭窄的同时拮抗血栓形成。与WT血管拉伤组相比，LFN干预后可上调IκB、NRF2、NQO-1和HO-1基因与蛋白表达（P<0.05,P<0.01），下调Keap-1基因和蛋白表达量（P<0.05,P<0.01），此调控作用在NRF2^-/-突变型大鼠中可被逆转。NF-κB、NRF2及其配体敲减或过表达可影响LFN对HCASMC模型迁移和侵袭能力的拮抗作用，并可不同程度削弱其对细胞内NF-κB与NRF2/ARE通路关键蛋白和基因表达的调控能力。结论 LFN抗血管再狭窄具备体内应用有效性，该效应的部分机制是LFN通过对NF-κB和NRF2/ARE通路上核转录因子及其关键配体的表达进行双通道正反两个方向的统一调控而实现。

关键词

紫杉醇-比伐卢定复合物 / 介入器械涂层 / 再狭窄 / NF-κB与NRF2/ARE通路 / 分子机制