雷公藤红素上调Nrf2/SIRT3信号通路缓解H₂O₂诱导心肌细胞氧化应激损伤

摘要

目的 探究雷公藤红素（CEL）激活核因子E2相关因子2（Nrf2）/沉默信息调节因子3（SIRT3）信号通路改善过氧化氢（H₂O₂）诱导心肌细胞氧化应激损伤。方法 用浓度为0.5～3.0μmol/L的雷公藤红素与H₂O₂共同处理AC16细胞，CCK-8法测细胞活性，筛选雷公藤红素最佳浓度；将AC16细胞分为Control组、H₂O₂组、雷公藤红素低、中、高浓度组（CEL-L+H₂O₂组、CEL-M+H₂O₂组、CEL-H+H₂O₂组）、雷公藤红素高浓度+Nrf2抑制剂组（CELH+ML385+H₂O₂组）；用流式细胞仪检测细胞凋亡；用酶标仪检测细胞丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、乳酸脱氢酶（LDH）活性；用免疫荧光检测AC16细胞活性氧（ROS）含量；免疫荧光法检测细胞线粒体膜电位（MMP）;Western blot检测B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）、促凋亡蛋白（Caspase-3）、Nrf2、SIRT3蛋白表达。结果 浓度为1.5～2.5μmol/L的雷公藤红素可促进H₂O₂诱导的AC16细胞增殖，选择浓度为1.5μmol/L、2.0μmol/L、2.5μmol/L进行后续实验。与Control组相比，H₂O₂组细胞凋亡率、活化的Caspase-3（Cleaved-Caspase-3）、Bax蛋白表达、ROS、LDH、MDA水平明显升高，MMP、SOD水平、Nrf2、SIRT3蛋白表达降低（P<0.05）；与H₂O₂组比较，CEL-L+H₂O₂、CEL-M+H₂O₂、CEL-H+H₂O₂组AC16细胞凋亡率、C-Caspase-3、Bax蛋白表达水平、ROS、LDH、MDA水平依次降低，MMP、SOD水平、Nrf2、SIRT3蛋白表达升高（P<0.05）；与CEL-H+H₂O₂组比较，CEL-H+ML385+H₂O₂组AC16细胞凋亡率、C-Caspase-3、Bax蛋白表达水平、ROS、LDH、MDA水平显著上升，MMP、SOD水平、Nrf2、SIRT3蛋白表达下降（P<0.05）。结论 雷公藤红素能够减轻H₂O₂诱导的心肌细胞氧化应激损伤，其可能是通过激活Nrf2/SIRT3信号通路实现的。

关键词

雷公藤红素 / 核因子E2相关因子2/沉默信息调节因子3信号通路 / 氧化应激 / 损伤