乌司他丁调节GSK-3β/β-catenin信号通路对人主动脉夹层血管平滑肌细胞增殖、迁移及凋亡的影响

摘要

目的 探讨乌司他丁（ulinastatin,UTI）调节糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3β)/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路对人主动脉夹层（aortic dissection,AD）血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）增殖、迁移及凋亡的影响。方法 将AD患者切除的血管用组织块贴壁法进行原代VSMC提取，并传代培养；且进行考马斯亮蓝染色及α-SMA免疫荧光染色鉴定细胞。体外培养的VSMC随机分为Control组、L-UTI组（500μmol/L UTI）、H-UTI组（1 500μmol/L UTI）、H-UTI+pcDNA-NC组（1 500μmol/L UTI+转染pcDNA-NC）、HUTI+pcDNA-GSK-3β组（1 500μmol/L UTI+转染pcDNA-GSK-3β）。qRT-PCR检测各组细胞中GSK-3β相对表达水平；CCK8及平板克隆形成实验测定各组细胞的增殖；划痕实验观察各组细胞的迁移；流式细胞仪测定各组细胞的凋亡；Western blot测定各组细胞中增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）、GSK-3β/S1P/S1PR3信号通路相关蛋白（p-GSK-3β/GSK-3β、β-catenin）的表达。结果 与Control组相比，L-UTI组、H-UTI组细胞的存活率、克隆数、划痕愈合率、PCNA、Bcl-2、p-GSK-3β/GSK-3β、β-catenin蛋白表达降低，而细胞凋亡率、Bax蛋白表达升高（P<0.05）；与H-UTI组或H-UTI+pcDNA-NC组相比，H-UTI+pcDNA-GSK-3β组细胞的存活率、克隆数、划痕愈合率、PCNA、Bcl-2、p-GSK-3β/GSK-3β、β-catenin蛋白表达升高，而细胞凋亡率、Bax蛋白表达降低（P<0.05）。结论 UTI可能是通过调节GSK-3β/β-catenin信号通路，诱导AD患者VSMC凋亡，抑制细胞增殖、迁移。

关键词

乌司他丁 / 糖原合成酶激酶-3β/β-连环蛋白信号通路 / 主动脉夹层 / 血管平滑肌细胞 / 增殖 / 迁移 / 凋亡