Circ-NNT调节miR-23a-3p/PDCD4通路对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响

摘要

目的 探讨环状RNA(CircRNA)烟酰胺核苷酸转氢酶（NNT）调节微小RNA-23a-3p(miR-23a-3p)/程序性细胞死亡因子4(PDCD4)通路对高糖（HG）诱导的心肌细胞损伤的影响。方法 本研究以人心肌细胞AC16为研究对象，实验分组如下：对照组（正常培养的AC16细胞）；HG诱导AC16细胞后分五组：HG组、sh-NC组（阴性对照）、sh-Circ-NNT组（Circ-NNT敲低）、sh-Circ-NNT+NC inhibitor组（阴性抑制剂对照）、sh-Circ-NNT+miR-23a-3p inhibitor组（miR-23a-3p抑制）。检测指标包括：qRT-PCR检测Circ-NNT、miR-23a-3p及PDCD4 mRNA表达水平；CCK8实验与EDU染色法评估细胞增殖能力；流式细胞术分析细胞凋亡率；乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性检测试剂盒测定LDH释放量；ELISA法检测炎性因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）表达水平；Western blot检测PCNA、MMP9、Bax、BCL2、Cleaved Caspase-3及PDCD4蛋白表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证Circ-NNT与miR-23a-3p、以及miR-23a-3p与PDCD4之间的靶向关系。结果 与对照组相比，HG组细胞Circ-NNT、PDCD4mRNA增加，miR-23a-3p减少，细胞存活率、增殖率减少，凋亡率增加，LDH及炎性因子水平增加，PCNA、MMP9、Bcl-2表达减少，促凋亡蛋白（Bax、cleaved caspase-3）、PDCD4表达增加（P<0.05）；与HG组、sh-NC组相比，shCirc-NNT组、sh-Circ-NNT+NC inhibitor组细胞Circ-NNT、PDCD4 mRNA减少，miR-23a-3p增加，细胞存活率、增殖率增加，凋亡率减少，LDH及炎性因子水平减少，PCNA、MMP9、Bcl-2表达增加，促凋亡蛋白（Bax、cleaved caspase-3）、PDCD4表达减少（P<0.05）；与sh-Circ-NNT组、sh-Circ-NNT+NC inhibitor组相比，sh-Circ-NNT+miR-23a-3p inhibitor组细胞PDCD4 mRNA增加，miR-23a-3p减少，细胞存活率、增殖率减少，凋亡率增加，LDH及炎性因子水平增加，PCNA、 MMP9、 Bcl-2表达减少，促凋亡蛋白（Bax、 cleaved caspase-3）、 PDCD4表达增加（P<0.05）。双荧光素酶报告结果发现，分别转染Circ-NNT、PDCD-WT的心肌细胞中，miR-23a-3p mimic组的荧光素酶活性降低（P<0.05）。结论 敲除Circ-NNT能够通过调节miR-23a-3p/PDCD4通路，促进miR-23a-3p表达，抑制PDCD4表达，从而减轻HG诱导的心肌细胞损伤，抑制炎症反应，促进心肌细胞的存活。

关键词

环状RNA烟酰胺核苷酸转氢酶 / 微小RNA-23a-3p/程序性细胞死亡因子4 / 高糖诱导 / 心肌细胞损伤