Cldn14基因敲除对大鼠草酸钙结石诱导形成的影响及其机制

摘要

目的 探究紧密连接蛋白14(Cldn14)基因敲除对大鼠肾脏代谢及结石诱导形成的影响及其机制，为尿钙代谢及结石领域研究提供参考。方法 将野生型大鼠与同周龄Cldn14基因敲除的纯合子大鼠分别随机分为野生型对照(WC)组、野生型乙二醇(WE)组、基因敲除对照(KC)组及基因敲除乙二醇(KE)组，每组10只。其中WE、KE组采用乙二醇+氯化铵方式诱导肾结石形成，WC和KC组采用生理盐水灌胃。标准维持饲料喂养4周后收集大鼠尿液，并进行静脉血检测，同时收集大鼠肾脏行HE、钙盐染色及透射电镜观察并提取肾组织蛋白。采用蛋白质印迹法检测紧密连接蛋白16(Claudin16)及紧密连接蛋白19(Claudin19)的表达水平。结果 WE组与KE组肾小管腔内均可见晶体沉积，且KE组晶体多于WE组；相比于KC组，KE组在透射电镜下的肾小管上皮细胞中可见大量胞质内黑色结晶性包涵体，而WE组包涵体数量显著多于KE组。相比于WC和WE组，KC和KE组大鼠的血钙及血镁水平显著降低而尿钙水平则明显升高。此外，WE组相对于WC组、KE组相对于KC组尿钙水平进一步上升。KE组大鼠肾脏组织Claudin16水平显著降低，然而四组大鼠肾脏组织Claudin19水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 单纯敲除Cldn14基因并不能有效减少大鼠尿钙排泄及降低结石形成的风险，这可能与Claudin16水平降低有关。

关键词

尿钙代谢 / 分子生物学 / Cldn14基因 / 肾结石 / 紧密连接蛋白 / 乙二醇