E2F2在肾透明细胞癌中的高表达及其与预后和肿瘤免疫微环境的相关性

摘要

目的 探讨转录因子E2F2在肾透明细胞癌(ccRCC)中的表达特征、对预后的影响及在肿瘤免疫微环境中的潜在作用，并通过临床样本和功能实验验证。方法 从癌症基因组图谱(TCGA)数据库获取ccRCC患者RNA测序数据及临床资料，基因表达综合数据库(GEO)下载GSE53757和GSE66272作为外部验证集，比较ccRCC组织与正常组织中E2F2的表达差异。分析E2F2表达水平与临床及病理特征的关系。采用Kaplan-Meier(KM)生存分析以及log-rank检验评估E2F2对总体生存期(OS)、无进展生存期(PFS)和疾病特异性生存期(DSS)的影响。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估E2F2对患者1、3、5年生存状态的预后预测效能。采用基因富集分析(GSEA)E2F2相关信号通路。采用ESTIMATE与CIBERSORT算法评估E2F2表达水平与肿瘤免疫细胞浸润及免疫微环境的关系。收集中南大学湘雅医学院附属株洲医院20例经术后病理确诊的ccRCC患者的肿瘤组织及其配对癌旁正常组织，免疫组织化学检测E2F2蛋白表达水平。采用人ccRCC细胞系786-O进行细胞功能实验，使用shRNA干扰E2F2表达(构建shE2F2#1和shE2F2#2稳定转染株),通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白质印迹法分别验证干扰效率。采用MTT、克隆形成和Transwell迁移实验验证E2F2对ccRCC细胞生物学行为的影响。结果 E2F2在ccRCC组织中显著高表达(外部验证集结果与之相同),E2F2高表达与组织学分级、临床分期、TNM分期显著相关(P<0.05)。KM生存分析显示，E2F2高表达组较低表达组患者的OS(P=0.019)、PFS(P=0.036)和DSS(P<0.001)均更短。E2F2预测ccRCC患者1、3、5年生存情况的ROC曲线下面积分别为0.844、0.851、0.815。GSEA结果显示，E2F2低表达组富集于多种代谢相关通路，高表达组则与免疫功能通路相关。免疫分析显示，E2F2高表达水平与肿瘤免疫评分升高、免疫细胞比例升高、肿瘤突变负荷升高及更强的免疫治疗响应能力相关。免疫组化结果显示，ccRCC组织中E2F2免疫评分显著高于癌旁正常组织(P<0.05)。细胞实验显示，E2F2沉默可显著抑制ccRCC细胞的增殖、克隆形成及迁移能力。结论 E2F2在ccRCC中高表达，可能通过调控免疫微环境参与肿瘤发生与进展，其表达水平与患者预后密切相关，有望成为ccRCC潜在的预后生物标志物及免疫治疗靶点。

关键词

E2F2 / 肾透明细胞癌 / 预后 / 免疫浸润 / 基因富集分析(GSEA) / 免疫治疗

基金资助

湖南省自然科学基金项目(No.2024JJ7660)