基于RhoA/ROCK1通路探讨白芍总苷对大鼠肠缺血再灌注损伤的影响

摘要

目的：基于Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)通路探讨白芍总苷（TGP）对大鼠肠缺血再灌注（IIR）损伤的影响及作用机制。方法：采用夹闭肠系膜上动脉1 h的方法构建IIR损伤大鼠模型，设假手术（Sham）组、模型（Model）组、TGP组、TGP+Rhosin(RhoA抑制剂)组和TGP+LPA(RhoA激动剂)组，每组8只。连续1次/d给药治疗4周后，ELISA法检测血浆中肠屏障指标[二胺氧化酶（DAO）、D乳酸（D-LA）和内毒素（ET）]的活性或水平，通过计算肠湿干比重（W/D）评价肠含水量，HE染色法观察肠组织病理学改变并通过Chiu's评分评价小肠损伤程度，TUNEL法观察肠细胞凋亡状况，ELISA法检测血清中炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-1β(IL-1β)]，分光光度法检测血清中氧化应激指标[丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）],Western blot法检测RhoA、ROCK1、核因子-κB p65(NF-κB p65)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭锁蛋白（Occludin）表达。结果：与Model组比较，TGP组和TGP+Rhosin组大鼠血浆中DAO活性、D-LA和ET含量、肠W/D比值显著降低（P<0.05）；肠组织病理学改变明显改善，Chiu's评分和细胞凋亡指数显著降低（P<0.05）；血清中TNF-α、IL-18、IL-1β、MDA含量显著降低，SOD、CAT活性显著升高（P<0.05）;RhoA、ROCK1、NF-κB p65蛋白表达量显著降低，HIF-1α、ZO-1、Occludin蛋白表达量显著升高（P<0.05）。与TGP组相比，Rhosin可明显加强TGP对IIR大鼠各检测指标的作用（P<0.05）,LPA则明显减弱TGP上述作用（P<0.05）。结论：TGP可能通过下调RhoA/ROCK1通路，抑制炎症反应和氧化应激，改善肠屏障功能，对大鼠IIR损伤起到保护作用。

关键词

白芍总苷 / 肠缺血再灌注 / Ras同源基因家族成员A / Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1 / 肠屏障