FOXQ1通过促进p53去乙酰化抑制结直肠癌DNA损伤性凋亡的机制研究

摘要

目的:探究FOXQ1表达对结直肠癌化疗药物耐药的影响,分析其在DNA损伤应答（DDR）状态下对SIRT1表达及p53去乙酰化的调节作用。方法:qRT-PCR检测SW620细胞和接受顺铂（CDDP）刺激后SW620细胞的FOXQ1 mRNA表达量,构建FOXQ1过表达和RNA干扰慢病毒,将细胞分为FOXQ1过表达组（oe-FOXQ1）、FOXQ1 RNA干扰组（sh-FOXQ1）以及转染空病毒的对照组（NC）,CCK-8法检测各组细胞CDDP的半抑制浓度(IC₅₀)值。通过Annexin V-APC/7-ADD凋亡试剂盒及Calcein/PI染色方法评估细胞的凋亡状态和活性。Western blot检测FOXQ1对SIRT1、乙酰化p53表达水平的影响,加入SRIT1通路抑制剂（S）-Selisistat,观察p53乙酰化水平变化。结果:与正常结肠组织相比,在SW620细胞中FOXQ1的表达显著上调（P<0.05）,且低浓度的CDDP刺激可以进一步促进其表达（P<0.05）。在经过CDDP处理24 h后,测得oeFOXQ1、sh-FOXQ1以及NC组的IC₅₀值分别为58.3、36.4、43.7μmol/L,组间差异具有统计学意义（P<0.05）。与NC组相比,oe-FOXQ1组晚凋细胞数降低（P<0.05）,sh-FOXQ1组升高（P<0.05）。细胞毒性荧光染色提示oe-FOXQ1组细胞死亡比例低于NC组（P<0.05）,sh-FOXQ1组细胞死亡高于NC组（P<0.05）,oe-FOXQ1组FOXQ1、SIRT1蛋白表达水平同时高于NC组（P<0.005）,sh-FOXQ1组则低于NC组（P<0.05）,FOXQ1过表达能促进p53去乙酰化,添加SRIT1通路抑制剂（S）-Selisistat能恢复P53的乙酰化水平（P<0.05）。结论:FOXQ1能通过上调SIRT1的表达,促进p53去乙酰化,进而抑制DDR引发的细胞凋亡。2.5 FOXQ1降低CDDP对SW620的细胞毒性荧光染色显示,同条件CDDP（15μmol/L,24 h）处理后,oe-FOXQ1组细胞死亡比例明显低于NC组（P<0.05）,sh-FOXQ1组细胞死亡比例升高（P<0.05）。见图4。

关键词

结直肠癌 / FOXQ1 / SIRT1 / p53乙酰化 / 凋亡