ISET联合循环肿瘤细胞免疫荧光技术的优化及临床验证

摘要

目的：优化之前建立的改良膜过滤法（ISET）循环肿瘤细胞（CTCs）检测技术体系，并结合细胞免疫荧光技术，开发并验证一种新的可靠的CTCs检测方法。方法：以胃癌803细胞系与健康志愿者的外周血混合样本模拟的肿瘤患者的外周血为研究对象，优化CTCs检测技术体系；对23例晚期（Ⅲ/Ⅳ）肿瘤患者的外周血样本，采用ISET技术结合细胞免疫荧光技术（ICC）和蜡块免疫组织化学（IHC）鉴定技术进行验证；以74例不同癌症类型患者的样本为研究队列，比较膜过滤结合免疫荧光（ISET-ICC）系统与CTC-Biopsy和CellSearch^TM方法的诊断性能。结果：通过添加红细胞裂解步骤并将滤膜孔径增加到10μm，将ISET方法的过滤时间缩短了3倍。ISET-ICC检测显示CTCs阳性率达65.2%。ISET-ICC与IHC方法结合使用，提高了发生上皮间质转化的循环肿瘤细胞（EMT-CTC）鉴定的可靠性。ISET-ICC技术在研究队列中显示出明显更高的CTCs阳性率（17.6%,13/74），相比之下，CellSearch^TM方法CTCs阳性率为12.2%（9/74），差异有统计学意义（χ²=10.21,P=0.007）。不同分期患者阳性检出率差异有统计学意义（χ²=3.64,P=0.029），并且Ⅳ期患者的CTCs阳性率明显高于I～Ⅲ期患者（χ²=6.76,P=0.001）。结论：ISET-ICC系统能够有效检测不同癌症类型中的CTCs，并显示出比CellSearch^TM系统更高的准确性。

关键词

循环肿瘤细胞 / 膜滤过分离肿瘤细胞技术 / 细胞免疫荧光技术

基金资助

济南市市校融合发展战略工程项目（JNSX2023059