AngⅡ联合FGF-2诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的研究

摘要

目的观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）联合成纤维细胞生长因子2(FGF-2)诱导骨髓间充质干细胞（BMSCs）向心肌样细胞分化的作用及相关机制。方法 提取并鉴定大鼠原代BMSCs，将BMSCs分为对照组、AngⅡ组、 FGF-2组及联合组（AngⅡ+FGF-2），各自及联合加入AngⅡ和FGF-2诱导其分化。采用免疫荧光、Western blot分别检测各组BMSCs中，心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnI）、间隙连接蛋白43(Cx43)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、结蛋白（Desmin）的表达水平；RT-qPCR检测各组BMSCs中心肌转录因子Nkx2.5的表达水平；Western blot检测对照组及联合组BMSCs中RAS蛋白（RAS）、磷酸化的有丝分裂原活化蛋白激酶（P-MEK）、磷酸化的细胞外信号调节激酶（P-ERK）表达水平。结果 免疫荧光结果显示，相较于对照组、AngⅡ组、FGF-2组，联合组中cTnI表达量最高（1.000±0.110、3.219±0.374、4.262±0.269 vs 6.950±0.220,P<0.05）。Western blot结果显示，与其他组相比，联合组中Cx43(0.278±0.106、0.603±0.012、0.670±0.034 vs 1.200±0.061,P<0.05),Desmin(0.361±0.105、0.787±0.029、0.831±0.057 vs 1.312±0.008, P<0.05), cTnT(0.471±0.112、 0.927±0.029、 0.920±0.042 vs 1.328±0.128, P<0.05)蛋白表达量最高。RT-qPCR结果显示，与其他组相比，联合组诱导4周后Nkx2.5基因表达量最高（1.000±0.000、1.570±0.020、1.577±0.051 vs 2.273±0.252,P<0.05）。Western blot结果显示，与对照组相比，联合组中RAS(0.837 7±0.040 0 vs 0.324 7±0.102 1,P<0.05),P-MEK(0.956 9±0.039 1 vs 0.324 8±0.043 4,P<0.05),P-ERK(0.927 8±0.099 2 vs 0.510 3±0.030 2,P<0.05)蛋白表达水平升高。结论AngⅡ与FGF-2联合可以更高效促进BMSCs向心肌样细胞分化，该分化过程可能与ERK信号通路有关。

关键词

血管紧张素Ⅱ / 成纤维细胞生长因子2 / 骨髓间充质干细胞 / 心肌样细胞 / ERK信号通路