骨髓干细胞外泌体负载一贯煎对肝癌干细胞凋亡的影响

摘要

目的 探究骨髓干细胞（BMSCs）外泌体（Exos）负载一贯煎（YGJ）对肝癌干细胞（LCSCs）凋亡的影响。方法 分离SD大鼠的BMSCs，提取BMSCs的Exos。利用反复冻融法将Exos分别负载YGJ和其有效成分槲皮素（HPS），即YGJ-Exos、HPS-Exos。通过透射电镜及Western blot对纯培养基、BMSCs-Exos、YGJ-Exos、HPS-Exos进行表征鉴定。利用流式细胞仪从Hep3B细胞中分选CD133⁺EpCAM⁺LCSCs，将CD133⁺EpCAM⁺LCSCs分别与PBS（con组）、BMSCs-Exos（Exos组）、YGJ-Exos（YGJ-Exos组）及HPS-Exos（HPS-Exos组）共培养48 h。采用Western blot检测各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、 Bax表达及Bcl-2/Bax比值情况；采用RT-qPCR与Western blot检测各组细胞Wnt3a、LOXL2的mRNA及蛋白表达。结果 经流式细胞仪分选的CD133⁺EpCAM⁺LCSCs呈典型的球形聚团悬浮生长，纯度94.3%。经体外分离培养成功提取大鼠BMSCs。BMSCs-Exos、YGJ-Exos、HPS-Exos均呈现典型的球状形态，具有完整的脂质双层膜结构；载药后Exos标志蛋白CD63、 CD81和TSG101均有表达。Western blot结果显示，与con组比较，YGJ-Exos组与HPS-Exos组的Bcl-2蛋白表达降低，Bax蛋白表达升高，Bcl-2/Bax比值降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。RT-qPCR及Western blot结果显示，与con组比较，YGJ-Exos组与HPSExos组的Wnt3a与LOXL2 mRNA及蛋白表达均降低，差异有统计学意义（均P<0.01）。结论BMSCs-Exos负载YGJ及其有效成分HPS可能通过降低Wnt3a及LOXL2表达促进LCSCs的凋亡，从而抑制肝细胞癌的进展。

关键词

肝细胞癌 / 肝癌干细胞 / 骨髓间充质干细胞 / 外泌体 / 一贯煎