microRNA-210-3p通过调控TET2的表达抑制大鼠炎性疼痛

摘要

目的 探讨microRNA-210-3p(miR-210-3p)与10-11易位蛋白2(ten-eleven translocation 2,TET2)在完全弗氏佐剂(complete freund's adjuvant, CFA)诱导的大鼠炎性疼痛模型中的作用及其相互调控机制。方法 通过生物信息学方法和双荧光素酶实验，分析并确定大鼠miR-210-3p中可以靶向调节的基因。实验中的质粒和miR-210-3p共转染组合分为pmirGLO+mimics NC组、pmirGLO+mimics-miR-210-3p组、TET2-WT-pmirGLO+mimics-NC组、TET2-WT-pmirGLO+mimics-miR-210-3p组、TET2-MT-pmirGLO+mimics-NC组和TET2-MT-pmirGLO+mimics-miR-210-3p组；60只大鼠按随机数字表法分为正常对照(normal control, CON)组(n=20)、CFA组(n=20)、CFA+腺相关病毒载体阴性对照(adeno-associated virus negative control,AAV NC)组(n=10)、CFA+AAV miR-210-3p抑制剂(adeno-associated virus miR-210-3p inhibitor, AAVi)组(n=10)。通过在大鼠左后足底部皮下注入CFA的方式建立大鼠炎性疼痛模型；通过尾静脉注入miR-210-3p inhibitor的AAV建立干预模型；观察并测量大鼠行为学；采用RT-qPCR法检测miR-210-3p的表达量；采用Western blotting法和免疫荧光染色法检测L4～L6腰膨大节段脊髓中TET2蛋白的表达水平及荧光强度的变化；采用免疫荧光染色法观察TET2蛋白在大鼠脊髓中的细胞表达定位。结果 生物信息学方法发现，TET2基因3'UTR区域存在与miR-210-3p的结合位点；双荧光素酶报告基因实验证实了miR-210-3p与TET2基因之间存在结合位点，呈负向调控关系；注射CFA显著减小了大鼠的机械缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold, PWMT)和热缩足潜伏期(paw thermal withdrawal latency, PTWL)(P<0.05);CFA组大鼠脊髓腰膨大中miR-210-3p的表达水平明显上调，伴随着TET2的表达水平降低(P<0.05);免疫荧光结果显示，TET2蛋白主要和神经元细胞存在共定位：CFA组大鼠脊髓内TET2蛋白表达水平降低(P<0.05);经过AAVi干预后，CFA+AAVi组大鼠在各个时间的PWMT和PTWL较CFA+AAV NC组大鼠升高(P<0.05);CFA+AAVi组大鼠脊髓组织中TET2蛋白表达较CFA+AAV NC组升高(P<0.05)。结论 miR-210-3p可以抑制TET2蛋白表达，通过抑制miR-210-3p在炎性疼痛大鼠中的表达可以有效减轻炎性疼痛。

关键词

microRNA-210-3p / 10-11易位蛋白2 / 炎性疼痛 / 完全弗氏佐剂 / 腺相关病毒载体