NR4A1通过IκBα/NF-κB通路调控过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的机制

摘要

目的 探讨过氧化氢（H₂O₂）诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）氧化应激中孤核受体NR4A1表达变化，以及其对细胞凋亡的影响及机制。方法 使用不同浓度及时间梯度H₂O₂处理HUVECs,采用CCK-8法检测细胞活性，TUNEL法检测细胞凋亡，Western blotting法检测Bcl-2、Bax与NR4A1蛋白表达；采用siRNA转染建立敲低NR4A1与对照的HUVECs,分为si-NC组及si-NR4A1组，H₂O₂处理后检测各组细胞抑凋亡蛋白Bcl-2、凋亡蛋白Bax表达，TUNEL法检测细胞凋亡；采用慢病毒感染建立稳定过表达NR4A1与对照的HUVECs,并进行H₂O₂处理，分为空载对照组（NC组）、过表达组（OV组）、NC+H₂O₂组及OV+H₂O₂组。TUNEL法检测各组细胞凋亡、Western blotting法检测各组中NR4A1、Bcl-2、Bax、总IκBα的蛋白表达、P65蛋白在细胞核/质定位。结果 200μmol/L H₂O₂处理细胞6 h, HUVECs活力显著下降，凋亡水平显著上升，Bax/Bcl-2比值升高（P<0.001）;NR4A1蛋白表达量增加；与si-NC组相比，si-NR4A1组在H₂O₂处理后细胞凋亡率、Bax/Bcl-2比值下降（P<0.001）;OV+H₂O₂组细胞凋亡率、Bax/Bcl-2比值较NC+H₂O₂组显著降低（P<0.001）;相较于NC+H₂O₂组，P65蛋白在OV+H₂O₂组中细胞核内表达显著降低（P<0.05）,细胞质内表达显著上调（P<0.001）;与NC+H₂O₂组相比，OV+H₂O₂组总IκBα表达上调（P<0.001）。结论 H₂O₂诱导HUVECs发生细胞凋亡；HUVECs内NR4A1蛋白过表达可抑制细胞凋亡，其作用机制可能与调控IκBα的表达与抑制NF-κB的核转位有关。

关键词

孤核受体NR4A1 / 人脐静脉内皮细胞 / IκBα蛋白 / NF-κB核转位 / 细胞凋亡