弗林蛋白酶靶向同源性磷酸-张力蛋白调控线粒体自噬及肝纤维化进展

摘要

目的 探讨弗林蛋白酶在肝纤维化发生发展中的调控作用及相关分子机制。方法 将40只C57小鼠随机分为弗林蛋白酶过表达组和对照组，每组20只，腹腔注射四氯化碳诱导小鼠肝纤维化动物模型，诱导8周。弗林蛋白酶过表达组小鼠在四氯化碳诱导4周后，尾静脉注射弗林蛋白酶过表达转染质粒至实验结束，对照组尾静脉注射无意义对照质粒，观察弗林蛋白酶调控小鼠肝纤维化进展的作用效应；采用Nycodenz密度梯度分离法分离C57小鼠肝脏原代星状细胞并进行体外培养；采用免疫组织化学/免疫荧光染色法检测弗林蛋白酶在肝纤维化/肝硬化组织的表达及定位；采用Western blotting法检测组织及细胞蛋白表达水平；采用CCK8法检测弗林蛋白酶处理后肝星状细胞的增殖活力；采用Transwell法检测不同处理组细胞迁移能力变化；采用流式细胞法及免疫荧光染色法检测不同处理组细胞线粒体膜电位变化。结果 弗林蛋白酶在肝硬化组织及活化的原代肝星状细胞中呈显著阳性。弗林蛋白酶处理组肝星状细胞活化、增殖及迁移能力显著受到抑制(P<0.05);对照组肝星状细胞活化、增殖以及迁移能力未受影响。弗林蛋白酶处理组肝星状细胞线粒体膜电位显著下降，对照组无明显下降(P<0.05);敲低同源性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog-long, PTEN-L)表达后肝星状细胞线粒体膜电位也显著下降(P<0.05),敲低对照组线粒体膜电位无明显改变。四氯化碳化学诱导实验中，弗林蛋白酶过表达组小鼠肝纤维化病变程度较轻，对照组小鼠出现较严重的肝纤维化组织学改变。结论 弗林蛋白酶通过靶向作用PTEN-L,增强肝星状细胞线粒体自噬，抑制其活化及小鼠肝纤维化进展。

关键词

肝星状细胞 / 肝纤维化 / 弗林蛋白酶 / 线粒体自噬 / 同源性磷酸酶-张力蛋白