NEDD4样E3泛素蛋白连接酶通过介导果糖二磷酸A的泛素化修饰调控胶质母细胞瘤细胞铁死亡敏感性

摘要

目的 探讨神经前体细胞表达发育性下调蛋白4(neural precursor cell expressed developmentally down-regulated 4 like, NEDD4L)介导胶质母细胞瘤(glioblastoma, GBM)铁死亡的作用，揭示NEDD4L介导醛缩酶(aldolase A, ALDOA,又名果糖二磷酸A)的泛素化修饰在铁死亡信号通路中的调控机制。方法 对TCGA-GBM数据库中NEDD4L基因表达水平进行分析，利用shRNA/CRISPR-Cas9技术在GBM LN229细胞中敲低/除NEDD4L,通过细胞死亡和脂质过氧化实验观察敲低NEDD4L表达对GBM铁死亡敏感性的影响，并利用蛋白质免疫共沉淀(co-immunoprecipitation, CO-IP)、免疫印记等实验鉴定ALDOA是NEDD4L的潜在修饰底物，通过siRNA方法敲低NEDD4L或ALDOA后检测其对GBM细胞铁死亡及铁死亡通路的影响。所有数据均使用GraphPad Prism 9.0软件进行统计分析。结果 敲除NEDD4L明显抑制IKE诱导的铁死亡发生，同时显著降低GBM细胞内的脂质过氧化水平(P<0.001),鉴定NEDD4L是ALDOA新的E3泛素化连接酶，并与ALDOA相互作用介导其单泛素化修饰，调控GBM细胞铁死亡易感性。敲低NEDD4L和ALDOA的表达均增强4EBP1和ACC的磷酸化水平以及上调GPX4蛋白的表达。结论 NEDD4L介导ALDOA的单泛素化修饰并可能通过影响mTORC1-4EBP1信号通路和脂质代谢促进GBM细胞的铁死亡敏感性。

关键词

胶质母细胞瘤 / 神经前体细胞表达发育性下调蛋白4 / 果糖二磷酸A / 泛素化 / 铁死亡