雷公藤甲素通过抑制NLRP3介导的焦亡改善单侧输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化

摘要

目的 探讨雷公藤甲素(triptolide,TPL)对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)小鼠肾间质纤维化的作用及机制。方法 随机选取6只雄性C57BL/6J小鼠作为Sham组，12只小鼠UUO建模成功后随机均分为模型组(UUO组)和TPL组。比较各组小鼠血肌酐(serum creatinine,SCr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、体质量水平变化;术后14 d采集肾组织行HE和Masson染色观察各组肾脏病理损伤程度;免疫组化染色观察肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及纤维连接蛋白(fibronectin,Fn)的表达。蛋白免疫印迹(Western blotting,Wb)方法检测NOD样受体热蛋白结构域蛋白3(nucleotide combined with structure of oligomerization domain receptor protein 3,NLRP3)、GSDMD、c GSDMD、IL-1β以及IL-18的蛋白表达。结果 在1周时，UUO组和TPL组小鼠体质量与Sham组相比均明显下降，差异有统计学意义(P<0.05);在2周时，TPL组小鼠体质量与Sham组相比明显下降，差异有统计学意义(P<0.01)，但与UUO组小鼠体质量之间无明显差异。BUN水平在3组间无差异;与Sham组比较，UUO组SCr水平明显升高[(15.680±1.508)μmol/L]，差异具有统计学意义(P<0.01)，给予TPL干预后，SCr水平明显下降[(12.550±3.004)μmol/L](P<0.05)，差异具有统计学意义。HE染色结果显示，与Sham组比，UUO组小鼠肾小管明显扩张，小管萎缩，小管间质水肿，肾间质炎性细胞浸润增加，给予TPL后，肾组织病理损伤程度明显缓解。Masson染色结果显示，UUO组肾小管间质胶原沉积明显增加(36.350±5.183)%，给予TPL治疗后小管间质胶原沉积减少(20.820±3.290)%(P<0.01)。免疫组化染色结果显示，与Sham组比，UUO组小鼠α-SMA及Fn的表达升高，IOD值分别为(1.233±0.045)和(1.337±0.045);而给予TPL治疗后，其蛋白表达较UUO组下降，α-SMA的IOD值为(1.047±0.025),Fn的IOD值为(1.113±0.021)(P<0.05)。Wb结果显示，与Sham组比，UUO组小鼠NLRP3、c GSDMD、IL-1β以及IL-18的蛋白表达升高;而给予TPL治疗后，上述指标的蛋白表达较UUO组明显下降(P<0.05)。结论 TPL可能通过抑制NLRP3介导的焦亡改善UUO小鼠肾间质纤维化。

关键词

雷公藤甲素 / NOD样受体热蛋白结构域蛋白3(NLRP3) / 单侧输尿管梗阻(UUO) / 肾间质纤维化

基金资助

国家自然科学基金资助项目(No.82170697,No.82405169); 陕西省重点产业创新链(群)项目(No.2024SF-ZDCYL-03-05); 陕西省自然科学基金资助项目(No.2022JM-472); 中国医师协会医学循证专委会肾科学组PRO·润基金资助项目(No.KYJ202206-0003-3)