lncRNA-NEF对肝星状细胞增殖、凋亡、上皮间质转化及细胞外基质合成的影响

摘要

目的 通过构建肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)活化模型,探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)-NEF对HSC增殖、凋亡、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)及细胞外基质合成的影响,为抗肝纤维化新药研发提供理论依据。方法 以TGF-β1(5ng/mL,24h)刺激人源性肝星状细胞系LX-2,构建活化HSC细胞模型。采用qRT-PCR和Western blotting检测α-SMA的表达,验证活化模型的成功构建。采用qRTPCR或Western blotting检测lncRNA-NEF、EMT相关分子的表达。通过慢病毒转染构建lncRNA-NEF过表达细胞系,采用EdU染色、流式细胞术、qRT-PCR和Western blotting方法检测lncRNA-NEF对HSC增殖、凋亡、EMT及细胞外基质合成的影响。结果 LX-2细胞活化后,lncRNA-NEF的mRNA表达降低(t=6.702,P<0.01),E-cadherin的mRNA(t=5.667,P<0.01)及蛋白(t=4.587,P<0.05)表达均降低,而N-cadherin mRNA(t=-21.190,P<0.000 1)及蛋白(t=-9.482,P<0.001)表达均升高。EdU、流式细胞术、qRT-PCR和Western blotting等结果提示过表达lncRNA-NEF后LX-2细胞增殖能力下降(t=7.153,P<0.01),凋亡细胞比例增加(t=-46.580,P<0.000 1),促凋亡蛋白Caspase-3表达增加(t=-8.596,P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降(t=18.590,P<0.000 1),EMT相关蛋白中E-cadherin表达升高(t=-10.060,P<0.001),N-cadherin表达下降(t=9.108,P<0.001),并且,α-SMA、collagenⅠ细胞外基质蛋白的表达下降(t=12.010,P<0.001;t=14.860,P<0.001)。结论 过表达lncRNA-NEF可抑制活化LX-2细胞的增殖、促进凋亡,逆转EMT,从而减少细胞外基质的合成。

关键词

lncRNA-NEF / 肝纤维化 / 凋亡 / 增殖 / 细胞外基质

基金资助

兰州市科技计划项目(No.2024-9-168)