白花蛇舌草提取物通过抑制有氧糖酵解和促进氧化磷酸化抑制肝癌细胞增殖

摘要

目的 探讨白花蛇舌草提取物(HDE)对肝癌细胞增殖的影响及其与有氧糖酵解和氧化磷酸化的关系，并分析其可能机制。方法 采用CCK-8实验和细胞增殖实验(5-ethynyl-2-deoxyuridine, EDU)检测不同质量浓度(20、40、80 mg/mL)HDE对肝癌细胞SNU-368增殖的影响；采用酶标仪检测乳酸脱氢酶活性、葡萄糖摄取、乳酸生成、线粒体呼吸链复合体活性，采用pH计检测细胞外液pH值，采用细胞氧耗仪检测细胞氧耗，分析HDE对SNU-368细胞有氧糖酵解和氧化磷酸化的影响；采用qRT-PCR实验检测各组SNU-368细胞中GLUT1、GLUT4、HK2、GPI、PFKL、ALDOA和HIF-1α的mRNA表达，采用Western blotting检测HIF-1α的蛋白表达。用过表达HIF-1α的慢病毒转染肝癌细胞SNU-368构建过表达HIF-1α稳转细胞株，并进行HDE相应干预后，采用qRT-PCR和Western blotting检测HIF-1α的mRNA及蛋白表达。结果 CCK-8实验显示，HDE呈一定的浓度依赖效应抑制肝癌细胞增殖(均P<0.05);糖代谢相关检测结果显示，HDE可以抑制葡萄糖摄取和乳酸生成，降低乳酸脱氢酶活性，升高细胞外培养液pH值，增加细胞氧耗和线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性(均P<0.05);qRT-PCR结果显示，HDE抑制了GLUT1、HK2、GPI、ALDOA mRNA的表达(均P<0.05)。qRT-PCR和Western blotting实验显示，与对照组相比，HDE组HIF-1α mRNA及蛋白的表达明显减少；而与HDE组相比，HDE干预过表达HIF-1α的HIF-1α-LV组中，HIF-1α mRNA及蛋白表达再次增加(P<0.05)。结论 HDE通过抑制肝癌细胞有氧糖酵解、促进氧化磷酸化而抑制肝癌细胞增殖，作用机制可能与抑制HIF-1α的表达有关。

关键词

白花蛇舌草提取物 / 肝癌细胞 / 糖酵解 / 氧化磷酸化 / 增殖

基金资助

国家自然科学基金资助项目(No.81700546); 陕西省科技厅自然科学基础研究计划项目(No.2023-JC-QN-0863)