基于Wnt/β-catenin通路探究迷迭香酸对结直肠癌上皮-间质转化的抑制作用

摘要

目的 探讨迷迭香酸(rosmarinic acid, RA)对结直肠癌(colorectal cancer, CRC) SW480细胞恶性行为的影响及机制。方法 通过收集2019年1月至2020年12月在如皋市人民医院接受手术治疗的初诊未经治疗的CRC患者的肿瘤组织以及正常人的结肠组织，用免疫组化和Western blotting方法检测β-catenin的表达，分析与临床分期、预后和免疫浸润的关系。CCK-8检测10、15、20μmol/L的RA对SW480细胞增殖的影响；流式细胞术检测细胞的凋亡情况；Transwell和划痕实验分别检测细胞的侵袭和迁移能力变化；Western blotting检测凋亡、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)及Wnt/β-catenin通路的相关蛋白表达情况。CRC SW480细胞系悬液皮下接种制作移植瘤小鼠模型，150 mL/kg RA溶液灌胃，观察RA对移植瘤生长的影响，ELISA检测了血清炎症因子变化。结果 正常结肠组织中β-catenin的表达很低，而CRC组织中β-catenin的表达明显增高。在CRC患者β-catenin高表达组中，肿瘤大于5 cm的患者数显著高于低表达组，而患者总生存期却显著小于低表达组(P<0.05)。各浓度RA组细胞增殖显著抑制，且呈浓度依赖性降低(P<0.05)。移植瘤小鼠模型中，RA处理组凋亡蛋白Bax和Bad表达较对照组显著增加，抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著减少(P<0.05)。同时可见SW480细胞的侵袭和迁移能力显著被抑制(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著增加，Snail、N-cadherin和Vimentin表达显著减少(P<0.05),而且Axin和GSK-3β表达增加，β-catenin表达减少(P<0.05)。结论 RA可能通过干预Wnt/β-catenin通路介导的EMT抑制SW480的生物学活性。

关键词

迷迭香酸(RA) / 结直肠癌(CRC) / Wnt/β-catenin通路 / 上皮-间质转化(EMT)

基金资助

国家自然科学基金面上项目(No.81871913); 南通市卫生健康委员会面上课题B(No.MB2021085)