脱氧胆酸通过ROS/NF-κB通路对Barrett食管细胞氧化应激的影响

摘要

目的 探讨脱氧胆酸(DCA)对人BAR-T细胞氧化应激的影响及机制。方法 体外培养人Barrett上皮细胞株BAR-T,采用不同浓度的DCA(100、200、300μmol/L)和不同作用时间(30 min、60 min、3 h、6 h)干预BAR-T细胞。采用Real-time PCR法和Western blotting法检测环氧酶-2(COX-2)的mRNA和蛋白表达；采用显微镜观察和流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)含量，并与200μmol/L DCA+5 mmol/L ROS清除剂N-乙酰半胱胺酸(NAC)组进行比较；采用细胞免疫荧光法检测细胞p65蛋白入核情况，并与200μmol/L DCA+100μmol/L NF-κB通路抑制剂吡咯烷二硫代甲酸铵(PDTC)组进行比较。结果 与对照组相比，DCA可以显著升高BAR-T细胞中ROS的含量，呈剂量依赖性，5 mmol/L NAC明显抑制DCA诱导的ROS释放。与对照组相比，相同干预时间下，DCA(200、300μmol/L组)均可以显著升高COX-2 mRNA表达。与1 h组相比，200、300μmol/L DCA 6 h组均可以显著升高COX-2 mRNA表达。与对照组比较，200μmol/L DCA可以显著升高COX-2蛋白表达。同时，200μmol/L DCA可以促进p65蛋白的入核，PDTC可以抑制DCA的作用。结论 DCA可能通过升高细胞内ROS水平，促进p65蛋白入核以激活NF-κB信号通路，进而上调COX-2的表达。

关键词

脱氧胆酸(DCA) / Barrett细胞 / 氧化应激 / NF-κB信号通路

基金资助

国家卫生部临床重点项目(No.2007353); 陕西省自然科学基金青年项目(No.2020JQ-557)