病原宏基因组测序DNA检测流程性能验证及结果分析

摘要

目的 建立病原宏基因组测序(metagenomic next-generation sequencing, mNGS)DNA检测流程的性能验证方案。方法 设计参考品并收集临床样本，从检测限、重复性、稳健性、抗干扰能力、特异性和准确性等维度评价mNGS分析性能，以及对不同建库方式及测序仪性能参数进行评估。结果 参考品内各物种均能稳定检出，mNGS检测限为(5.0E+02)CFU/mL(copies/mL)。重复性符合率100%,批内变异系数(coefficient of variation, CV)介于8.53%～38.73%。病原投入浓度与检出序列数的线性相关系数|r|>0.9,mNGS检测系统具有良好的稳定性。抗干扰实验结果显示，人源核酸浓度越高，mNGS检出病原序列数越少。近缘物种检出序列数比值与实际病原浓度比值接近，具有良好的检测特异性。零病原投入组D0检测结果为阴性。临床样本病原检出准确率为90.9%(10/11)。自动化移液工作站与手工建库的文库质控结果均合格。三台测序仪运行性能参数均满足或优于出厂标准。结论 初步建立了包含参考品设计、不同建库方式比较和测序仪性能参数评价等多方面在内的mNGS DNA检测流程的性能验证方案，可用于mNGS临床实验室分析性能评价及实验过程中的质量保障。

关键词

病原宏基因组测序(mNGS) / DNA检测 / 性能验证 / 参考品

基金资助

西安市重点产业链技术攻关集群项目(No.24LLRHZDZX0028)