ZBTB7B上调GPR17表达抑制脑胶质母细胞瘤细胞增殖

摘要

目的 揭示含锌指和BTB结构域的转录因子(zinc finger and BTB domain containing 7B,ZBTB7B)在胶质母细胞瘤中的抑癌作用及其分子机制,为胶质母细胞瘤的诊疗提供新策略。方法 采用慢病毒载体构建ZBTB7B稳定过表达的U251细胞系,通过细胞免疫荧光、实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)及蛋白质免疫印迹(Western blotting,WB)验证转染效率。通过活细胞动态监测系统、克隆形成实验及5-溴-2′-脱氧尿苷(5-bromo-2′-deoxyuridine,BrdU)掺入实验评估细胞增殖能力。进一步利用小干扰RNA(siRNA)敲降基因设计挽救实验验证ZBTB7B对其下调控基因的功能影响。通过免疫共沉淀技术(chromatin immunoprecipitation,ChIP)解析ZBTB7B与下游靶基因G蛋白偶联受体17(G protein-coupled receptor 17,GPR17)的靶向调控关系。结果 ZBTB7B过表达显著抑制U251细胞的增殖能力(P=0.002),表现为克隆形成率下降(P=0.01)及BrdU掺入量减少(P<0.001)。机制研究表明,ZBTB7B通过靶向结合GPR17的启动子区域,上调GPR17表达,进而抑制肿瘤细胞增殖(P<0.001)。结论 本研究证实ZBTB7B通过靶向结合并调控GPR17表达发挥抑癌作用,系统阐明了其在胶质母细胞瘤中的分子机制,为胶质母细胞瘤的靶向治疗提供了潜在新靶点。

关键词

胶质母细胞瘤(GBM) / ZBTB7B / GPR17 / 抑制肿瘤增殖

基金资助

陕西省教育厅科学研究计划项目(重点实验室项目)(No.22JS036)