异鼠李素靶向CYP1B1/NF-κB信号抑制乳腺癌进展并增强紫杉醇敏感性的机制研究

摘要

目的 通过体内和体外实验探索异鼠李素（ISO）抑制乳腺癌（BC）进展的生物学机制及对紫杉醇敏感性的影响。方法 通过CCK-8、划痕、Transwell侵袭和细胞凋亡实验探索ISO对MDA-MB-231细胞活力、迁移、侵袭和凋亡的影响。通过全基因组微阵列、功能富集和蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）分析ISO生物学功能并鉴定核心靶基因。通过定量实时聚合酶链式反应（qRT-PCR）、蛋白免疫印迹（WB）和Kaplan-Meier plotter数据库评估CYP1B1在BC中的表达特征及预后。通过CCK-8、划痕、Transwell侵袭和细胞凋亡实验探索CYP1B1过表达对MDA-MB-231细胞活力、迁移、侵袭和凋亡影响。通过建立皮下移植瘤动物模型分析ISO和CYP1B1对BC肿瘤生长的影响，并通过免疫组织化学（IHC）和苏木素-伊红（HE）染色进行组织学分析验证。通过qRT-PCR和WB分析ISO和CYP1B1对NF-κB信号的影响。通过体外和体内实验分析ISO联合紫杉醇对BC进展的影响。结果 CCK-8实验结果显示，ISO抑制MDA-MB-231细胞活力的IC50值为11.93μmol/L，划痕、Transwell侵袭和凋亡实验证实ISO可抑制MDA-MB-231细胞迁移和侵袭，促进细胞凋亡（P<0.05）。火山图显示共有80个差异表达基因（DEGs），其中ISO能促进27个基因表达，抑制53个基因表达。功能富集分析显示，DEGs主要富集在有机羟基化合物代谢过程、炎症反应、甾醇代谢过程以及核因子-κB(NF-κB)等信号中。PPI网络结果显示，ISO核心靶基因为细胞色素P450 1B1(CYP1B1)。qRT-PCR、WB和Kaplan-Meier plotter结果显示，CYP1B1mRNA和蛋白质在BC中表达增高且介导更差预后（P<0.05）。CCK-8、划痕、Transwell侵袭和细胞凋亡实验结果显示，CYP1B1过表达增强MDA-MB-231细胞活力、迁移和侵袭能力，抑制细胞凋亡，而加入ISO可逆转这种现象（P<0.05）。体内实验结果显示，ISO下调CYP1B1表达并减弱NF-κB信号（P<0.05）。体外及体内实验结果显示，ISO联合紫杉醇可显著抑制BC细胞活力和肿瘤生长（P<0.05）。结论 ISO通过调控CYP1B1/NF-κB信号轴抑制BC恶性生物学行为，且ISO能增强紫杉醇敏感性。

关键词

异鼠李素 / 乳腺癌 / CYP1B1 / NF-κB / 紫杉醇 / 小鼠

基金资助

安徽省教育厅高校科研重大项目（No.2022AH040357）; 安徽省卫生健康科研项目（No.AHWJ2023A30031）; 六安市科技计划项目（No.2024lakjey09）