neuritin通过MAPK/ERK信号通路促进神经元的突起生长、迁移及抑制凋亡

摘要

目的 明确neuritin是否通过MAPK/ERK信号通路促进神经元突起生长、迁移及抑制神经元凋亡。方法 利用Western blotting实验检测neuritin蛋白对ERK磷酸化水平的影响；利用neuritin重组蛋白联合PD98059处理细胞，细胞形态学观察PC12细胞突起生长情况，Western blotting实验检测MAP2蛋白表达；划痕实验、Transwell实验及Western blotting实验检测HT22细胞迁移、迁移相关基因girdin、palladin蛋白表达；流式细胞术、Western blotting实验检测细胞凋亡、caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 在His-neuritin处理细胞5 min后，与对照组相比，ERK1/2的磷酸化水平显著升高(P<0.000 1),在30 min后磷酸化水平开始降低，ERK1/2总蛋白表达水平都未出现变化。neuritin组可显著增加突起生长的阳性细胞数(P<0.01),加入PD98059处理后，neuritin促进突起生长的作用被显著减弱(P<0.01);neuritin可促进MAP2的表达(P<0.05),而加入PD98059后neuritin促进MAP2表达的功能减弱(P<0.000 1)。与对照组相比，neuritin组被结晶紫染色的细胞显著增多，划痕部位明显愈合(P<0.001),而加入ERK阻断剂后迁移的细胞明显减少(P<0.01);促迁移基因girdin以及抑制迁移基因palladin的表达被PD98059逆转(P<0.01)。与对照组相比，neuritin可以显著降低HT22细胞的早期和晚期凋亡(P<0.01),但在阻断剂处理组该现象被显著逆转(P<0.01)。neuritin重组蛋白可抑制caspase-3的裂解，促进下游因子Bcl-2的表达，抑制Bax的表达，而加入PD98059阻断剂后，neuritin抑制凋亡的作用被逆转(P<0.05)。结论 neuritin通过MAPK/ERK信号通路促进神经元的突起生长、迁移及抑制凋亡。

关键词

neuritin蛋白 / MAPK/ERK信号通路 / 突起生长 / 迁移 / 凋亡

基金资助

石河子大学高层次人才科研启动项目(No.RCZK202564)